RASSF1A基因和SOCS-1基因在骨髓增生異常綜合征患者中異常甲基化的研究.pdf

1、背景:骨髓增生異常綜合征(MDS)是起源于造血干細胞的一組高度異質性克隆性疾病，以一系或多系血細胞病態(tài)造血及無效造血，高風險向急性白血病轉化為特征。MDS的疾病進展是多因素多基因異常改變累積的過程，其發(fā)病機制尚未明確，近年來研究發(fā)現(xiàn)，遺傳學和表觀遺傳學的改變，特別是原癌基因突變或者抑癌基因失活，在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中起到重要作用。研究發(fā)現(xiàn)DNA甲基化是可逆的改變，逆轉基因啟動子區(qū)的甲基化能夠使沉默基因重新表達，成為惡性血液病治療的新靶點。新

2、近確定的抑癌基因RASSF1A和SOCS-1是當前腫瘤領域的新熱點，大量研究表明RASS1A和SOCS-1基因啟動子區(qū)的甲基化在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，但其對MDS的影響國內尚未見報道。
　　 目的:本研究通過檢測骨髓增生異常綜合征(MDS)患者骨髓RASSF1A基因和SOCS-1基因的表達水平及其啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)，探討RASSF1A和SOCS-1基因異常甲基化在MDS發(fā)生發(fā)展中的作用，并通過研究地西他濱治療前后抑癌基

3、因甲基化狀態(tài)的變化，為去甲基化藥物治療MDS提供新靶點。
　　 方法:實驗組選取30例MDS患者入組，對照組選取非惡性血液病患者15例入組，按MDS國際IPSS評分標準對實驗組進行分組。采用Ficoll液分選骨髓單個核細胞(MNCs)，按照基因組DNA提取試劑盒說明書提取患者骨髓血單個核細胞的DNA以及RPMI8226細胞株和U266細胞株的DNA，采用TrizolRNA提取液提取總RNA，應用甲基化特異性聚合酶鏈反應(MS-P

4、CR)、逆轉錄PCR(RT-PCR)法檢測兩組患者骨髓RASSF1A基因和SOCS-1基因mRNA表達水平及啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)。收集地西他濱治療前后患者骨髓血的同等量DNA進行MS-PCR和電泳，采用捷達凝膠系統(tǒng)和ImageJ軟件對條帶進行灰度分析，以目的基因與內參基因的比值代表PCR產物的相對含量，對比地西他濱治療前后MDS患者RASSF1A基因和SOCS-1基因的甲基化情況。
　　 結果:實驗組RASSF1A基因甲基化率(7

5、3.33％)明顯高于對照組（P＜0.05），且中高危MDS患者骨髓RASSF1A基因甲基化率(81.8％)明顯高于低危MDS患者(18.2％)(P＜0.05);實驗組RASSF1A基因mRNA表達水平(40％)明顯低于對照組(P＜0.05);實驗組SOCS-1基因甲基化率(53.33％)明顯高于對照組（P＜0.05），且中高危MDS患者骨髓SOCS-1基因甲基化率(65.2％)明顯高于低危MDS患者(14.3％)(P＜0.05);實驗組

6、SOCS-1(46.7％)基因mRNA表達水平明顯低于對照組（P＜0.05）;經地西他濱治療后MDS患者RASSF1A基因和SOCS-1基因的甲基化程度較初診時降低。
　　 結論:MDS患者骨髓RASSF1A基因和SOCS-1基因的異常甲基化與該基因的表達失活緊密相關，可能是MDS發(fā)生發(fā)展的機制之一，檢測RASSF1A基因和SOCS-1基因啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)有望成為判定MDS病情進展的新指標，指導MDS的臨床診治和預后轉歸;地