青娥方對(duì)骨組織細(xì)胞OPN、BSP及其受體整合素ανβ3影響的研究.pdf

1、目的:
　　以骨吸收為切入點(diǎn)，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，觀察青娥方對(duì)去卵巢大鼠OPN、BSP及其受體整合素αv、β3的影響，探討青娥方預(yù)防絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(PMOP)的作用機(jī)制，為青娥方的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組、造模、藥物干預(yù)及取材:選3月齡SPF級(jí)雌性SD大鼠120只，隨機(jī)分為去卵巢組90只（切除雙側(cè)卵巢）、假手術(shù)組30只（除不摘除卵巢，其余同去卵巢組）。去卵巢組90只隨機(jī)分成3組:青娥方組、骨

2、疏康組、生理鹽水組，統(tǒng)一于術(shù)后第3天開(kāi)始灌胃，分別灌服青娥方3.6g/kg/d、骨疏康1.8g/kg/d、生理鹽水2ml/只，假手術(shù)組余鼠30只亦灌服生理鹽水2ml/只，每天一次。于連續(xù)干預(yù)4周、8周、12周后取材（分三個(gè)批次）:取材前一天收集24小時(shí)尿液，離心去除沉淀，-20℃凍存待測(cè);腹主動(dòng)脈取血，離心取血清，-20℃凍存待測(cè);分離脛骨、股骨、腰椎等骨組織，-80℃保存待測(cè)。
　　2.指標(biāo)檢測(cè):Discovery Wi雙能X線

3、骨密度儀測(cè)定腰椎BMD;脛骨上段常規(guī)切片及HE染色，應(yīng)用Motic Med6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)，定量分析骨組織形態(tài);IG-A1000N萬(wàn)能材料試驗(yàn)機(jī)測(cè)定股骨最大載荷力(N)， ELISA法檢測(cè)血清中Cath-K、MMP-9、TRACP5b含量;ELISA法檢測(cè)尿液DPD含量;生化法檢測(cè)尿液Cr含量;第一、二腰椎分別檢測(cè)OPN、BSP、Itgαv、Itgβ3、p38mRNA和蛋白的含量。
　　結(jié)果:
　　1.骨密度測(cè)定:

4、隨著取材時(shí)間的推移，生理鹽水組腰椎BMD呈下降趨勢(shì)，低于同期假手術(shù)組，在8周、12周時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。兩用藥組腰椎BMD均高于同期生理鹽水組，在12W時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　2.骨組織形態(tài)學(xué)分析:卵巢摘除后，隨著取材時(shí)間的推移，生理鹽水組骨小梁變化明顯，骨小梁變細(xì)、變稀、不連續(xù)、完整性差，髓腔增大，形成大量骨陷窩。假手術(shù)組骨小梁分布均勻，排列規(guī)則，小梁間隙正常。兩用藥組骨小梁數(shù)目減少，骨小梁變細(xì)

5、、不連續(xù)，骨小梁出現(xiàn)微小斷裂，與同期生理鹽水組相比，骨小梁數(shù)目減少幅度不大，排列相對(duì)較規(guī)則，結(jié)構(gòu)完整性明顯優(yōu)于生理鹽水組，骨小梁面積百分比亦明顯高于同期生理鹽水組，在8W、12W時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05），青娥方組骨小梁面積百分比三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均低于同期假手術(shù)組，在12W時(shí)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.骨生物力學(xué)結(jié)果:卵巢摘除后，4W、8W、12W三個(gè)時(shí)期生理鹽水組股骨所能承受的最大載荷明顯低于同期

6、假手術(shù)組（P＜0.01或P＜0.05）。青娥方組股骨最大載荷力高于同期生理鹽水組，低于同期假手術(shù)組，在8周時(shí)與假手術(shù)組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），在12周時(shí)與生理鹽水組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），兩藥物組三個(gè)時(shí)期相比，差異不明顯，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　4.血清MMP-9、TRACP5b、Cath-K含量測(cè)定:隨著取材時(shí)間4W、8W、12W的推移，生理鹽水組血清MMP-9、TRACP5b、Cath-K

7、先上升后下降趨勢(shì)，高于同期假手術(shù)組（P＜0.01或P＜0.05），從數(shù)值上看，青娥方組血清MMP-9、TRACP5b、Cath-K均低于同期生理鹽水組，除血清MMP-9在4W及血清TRACP5b在12W時(shí)與同期生理鹽水組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)外，其余時(shí)間點(diǎn)比較均有顯著性差異（P＜0.01或P＜0.05）。
　　5.尿DPD/Cr比值:三個(gè)取材時(shí)間點(diǎn)，生理鹽水組尿DPD/Cr比值逐漸升高，用藥后，兩用藥組尿DPD/Cr

8、比值先下降后升高，均低于同期生理鹽水組(P＜0.01或P＜0.05)。兩藥物組三個(gè)時(shí)期相比，差異不明顯，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　6.骨組織OPN、BSP、Itgαv和Itgβ3mRNA和蛋白含量結(jié)果:取材4W、8W、12W，生理鹽水組四個(gè)指標(biāo)mRNA和蛋白含量呈先升高后下降，高于同期假手術(shù)組(P＜0.01)。藥物干預(yù)后，兩藥物組四個(gè)指標(biāo)mRNA和蛋白含量逐漸下降，低于同期生理鹽水組（P＜0.01）。假手術(shù)組的四個(gè)指標(biāo)

9、mRNA和蛋白含量逐漸升高，低于同期的兩用藥組(P＜0.01或P＜0.05)。
　　7.骨組織p38mRNA和蛋白含量結(jié)果:卵巢摘除后，三個(gè)取材時(shí)間點(diǎn)，生理鹽水組骨組織p38mRNA和蛋白含量明顯高于假手術(shù)組（P＜0.01），用藥后，兩藥物組骨組織p38mRNA和蛋白含量逐漸下降，青娥方組p38mRNA在8W、12W與同期生理鹽水組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），而青娥方組p38蛋白在12W時(shí)與同期生理鹽水組相比差異才有統(tǒng)計(jì)學(xué)意