職業(yè)接觸苯尿中苯巰基尿酸的高效液相色譜分析方法與應用研究.pdf

1、背景 苯(benzene)是一種廣泛使用的化學原料和有機溶劑，長期低濃度苯暴露可能損害造血系統(tǒng)甚至導致白血病。利用生物監(jiān)測可以全面反應機體的實際接觸情況，為了有效識別、評價苯的職業(yè)暴露水平，美國、德國、新加坡等發(fā)達國家根據(jù)本國苯的環(huán)境限值標準，已經(jīng)先后研制了苯的生物限值標準。苯的生物代謝產(chǎn)物包括酚類、反-反式粘糠酸(t,t-MA)和苯巰基尿酸(S-phenylmercapturic acid，S-PMA)等，S-PMA是苯的特異

2、性代謝產(chǎn)物之一，其作為苯的生物標志物受到普遍認可。為保護職業(yè)接苯人群的身體健康，我國目前修訂的苯的時間加權平均容許濃度(PC-TWA)為6mg/m3，根據(jù)環(huán)境暴露限值探討研制符合我國實際情況的生物接觸指標的檢測方法及生物接觸限值標準已經(jīng)提到議事日程。 目的： 根據(jù)高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)的基本分析原理和S-PMA理化性質(zhì)，探討運用HPLC法檢

3、測尿中S-PMA的尿樣預處理方法及色譜柱類型、柱溫、流動相、檢測波長等色譜條件的具體選擇，為開展苯的職業(yè)暴露生物監(jiān)測提供方法學依據(jù)；在HPLC法測定尿中S-PMA的方法學研制基礎上，通過對苯的環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)與尿中S-PMA的測定濃度進行相關分析，結合我國目前苯的環(huán)境暴露限值(PC-TWA=6mg/m3)，提出我國職業(yè)苯暴露生物監(jiān)測的S-PMA生物接觸限值和應用條件。 方法： 選擇非職業(yè)接觸苯及非吸煙的學生作為本次研究所用尿

4、樣基質(zhì)，根據(jù)測定分析目的在尿樣基質(zhì)中加入相應濃度的S-PMA儲備液，運用合適的預處理方法，采用Shim-pack VP-ODS色譜柱、35℃柱溫、205nm紫外檢測波長和混合流動相等色譜條件對樣品中的S-PMA進行定性定量分析。配制不同濃度S-PMA標準系列，通過制作標準曲線，求證測定方法測定S-PMA的濃度線性范圍；配制三種濃度的S-PMA尿樣，通過加標回收檢測，計算本方法的回收率；通過不同時間測定平行樣品的S-PMA濃度，計算本方法

5、的精密度。將尿樣放置于不同溫度環(huán)境中，于放置前、放置后3天、7天和14天對尿樣中的S-PMA進行測定，計算其穩(wěn)定性。 選擇32名職業(yè)接觸苯的工人作為研究對象，對研究對象的環(huán)境暴露水平進行個體采樣，收集研究對象班末尿樣，通過HPLC法測定尿樣中S-PMA濃度，通過環(huán)境苯濃度與尿液S-PMA濃度相關回歸分析，結合我國目前苯的環(huán)境暴露限值(6mg/m3)計算符合我國情況的S-PMA生物接觸限值。 結果： S-PMA的保

6、留時間在30.5min左右，所建立的標準曲線在S-PMA的質(zhì)量濃度為40～200μg/L時線性關系良好(r=0.9997)，檢測限40μg/L，加標回收率為92.64％～103.66％，日內(nèi)與日間精密度的相對標準偏差分別為2.4％～14.5％和3.8％～9.2％。將尿樣放入冰箱前當天、放入后第3天、第7天及第14天，計算4℃及-20℃條件下保存的尿樣S-PMA的相對標準偏差分別為6.60％和2.40％。 32名職業(yè)接苯工人空氣樣品個體采

7、樣檢測數(shù)據(jù)顯示，空氣苯的平均濃度為(41.16±34.74)mg/m3。32名工人尿中的S-PMA濃度為(464.04±400.79)μg/g Cr；將班末尿S-PMA與個體接苯水平建立直線回歸方程為：Y(μg/g Cr)=10.134X(mg/m3)+47.104，(n=32，r=0.7712，P<0.01)。結合我國目前苯的環(huán)境暴露限值為6mg/m3，計算的S-PMA生物接觸限值為107.8μg/g Cr。 結論：

8、1．HPLC法測定尿中S-PMA的色譜條件為：采用C18柱進行分離，以乙腈作為流動相A，乙腈-甲醇-三乙胺為流動相B進行梯度洗脫，流速2ml/min，柱溫35℃，紫外檢測波長205nm； 2．HPLC法測定尿中S-PMA的色譜行為、最低檢測限、檢測線性范圍、測定的準確度、精密度等能滿足職業(yè)苯暴露生物限值測定基本要求； 3．HPLC法測定尿中的S-PMA，其尿樣保存在4℃及-20℃條件下的時間建議在14天左右； 4