黑大蒜提取物與鮮大蒜提取物對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能影響的比較.pdf

1、前言:
　　 大蒜含有豐富的營養(yǎng)成分和藥理活性成分。藥理和臨床證實(shí)大蒜有抗菌消炎、殺蟲、抗癌、降血壓、降血脂、降血糖、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化、抗腫瘤、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)功能等作用[1-2],其中最重要的有效成分是大蒜素[3]。
　　 近年來日本學(xué)者在控制濕度和溫度的情況下,普通的鮮大蒜(白色)可以經(jīng)過處理轉(zhuǎn)化為黑大蒜。黑大蒜去除了大蒜的異味,帶有甜味,口感好,無需再經(jīng)處理即可直接食用。但黑大蒜在上述功能方面是否優(yōu)于鮮大蒜,目前尚

2、不清楚。已有研究報(bào)道黑大蒜較鮮大蒜含有更多的氨基酸、有機(jī)硫和S-烯丙基-L-半胱氨酸[4]。我們的前期研究已證明黑大蒜提取物對(duì)免疫功能有促進(jìn)作用[5]。本文則就黑大蒜提取物和鮮大蒜提取物對(duì)免疫功能的影響進(jìn)行了比較研究,可為黑大蒜的實(shí)際應(yīng)用進(jìn)一步提供科學(xué)依據(jù)。
　　 實(shí)驗(yàn)材料:
　　 一、主要試劑
　　 黑大蒜提取物(干粉,由同本弘前大學(xué)佐佐木甚一教授惠贈(zèng)),鮮大蒜提取物(自制),RPMI1640培養(yǎng)基,小牛血清,

3、0.01MPBS緩沖液,紅細(xì)胞裂解液,LDH底物液,Griess試劑,IL-2,IFN-γ,TNF-α,IL-4,IL-17EIJSA試劑盒。
　　 二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
　　 C57/BL-6小鼠,6-7周齡,購買于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。
　　 實(shí)驗(yàn)方法:
　　 一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理
　　 將上述75只C57/BL-6小鼠隨機(jī)分為15組,每組5只,第1-7組為黑大蒜組,第8-14組為鮮大蒜組,第

4、15組為正常對(duì)照組。將黑,鮮大蒜提取物用生理鹽水配制成1mg/ml的溶液。正常對(duì)照組每天腹腔注射0.1ml生理鹽水,第1-7組每天腹腔注射黑大蒜提取物溶液0.1ml,第8-14組每天腹腔注射鮮大蒜提取物溶液0.1ml。連續(xù)注射5天,于術(shù)次注射后的第1-7天,從第1和第8組開始,每天處死兩組(黑大蒜和鮮大蒜處理的各一組)小鼠,第15組小鼠于未次注射后第7天處死。
　　 二、樣品的采集與檢測(cè)
　　 1、脾細(xì)胞分離及其懸液的制

5、備:頸椎脫位處死小鼠,常規(guī)制備脾細(xì)胞懸液,調(diào)整細(xì)胞濃度至1×107/ml。
　　 2、LDH釋放法檢測(cè)NK細(xì)胞的殺傷活性。
　　 3、Griess法檢測(cè)脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中NO分泌水平。
　　 4、ELISA法檢測(cè)脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中Th1細(xì)胞因子IL-2,IFN-γ,TNF-α以及Th2細(xì)胞因子IL-4和Th17細(xì)胞因子IL-17的分泌水平。
　　 三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分

6、析軟件應(yīng)用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,P＜0.05有顯著性差異。
　　 結(jié)果:
　　 1、NK細(xì)胞殺傷活性的檢測(cè)結(jié)果
　　 在連續(xù)5天給予小鼠腹腔注射黑大蒜提取物與鮮大蒜提取物后,與正常對(duì)照組(2.81±0.21)%比較,黑大蒜和鮮大蒜處理后3-5天均顯示NK細(xì)胞殺傷活性顯著高于正常對(duì)照組;黑大蒜處理后第4天NK細(xì)胞殺傷活性最高,達(dá)(9.87±0.50)%,隨后逐漸下降;鮮大蒜組于處理后的第5天NK細(xì)胞殺傷活性最高,為(

7、4.91±0.24)%。黑大蒜組處理后第4天和第5天均顯著高于鮮大蒜組,P值分別為＜0.001和＜0.01。
　　 2、脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中NO產(chǎn)生的檢測(cè)結(jié)果
　　 與正常對(duì)照組(9.20±0.42)μM相比,黑大蒜組和鮮大蒜組于大蒜提取物處理后的第4天至第7天,小鼠的脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中的NO2-水平均顯著升高(P＜0.05)。黑大蒜組NO2-水平于第5天(18.38±0.74)μM,第6天(24.94±2.21)μM和第7天

8、(31.10±1.45)μM也顯著性高于鮮大蒜組第5天為(16.42±1.18)μM,第6天為(19.58±0.86)μM,第7天為(22.65±1.85)μM(P值均＜0.05,0.01或0.001)。
　　 3、脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子的檢測(cè)結(jié)果
　　 本實(shí)驗(yàn)中我們檢測(cè)了Th1細(xì)胞因子IL-2,IFN-γ,TNF-α以及Th2細(xì)胞因子IL-4和Thl7細(xì)胞因子IL-17的分泌水平。我們發(fā)現(xiàn)在給予小鼠連續(xù)5天注射黑大蒜

9、與鮮大蒜提取物后,正常對(duì)照組IL-2分泌水平(10.15±1.04)pg/ml,黑大蒜組的IL-2分泌水平明顯高于正常對(duì)照組,于第6天達(dá)到峰值(16.06±0.67)pg/ml,顯著性高于鮮大蒜(10.77±1.47)pg/ml,P值＜0.001。而鮮大蒜組與正常對(duì)照組未見顯著性差異。
　　 黑大蒜和鮮大蒜組IFN-γ的分泌水平自術(shù)次處理后第1天開始就顯示高于正常對(duì)照組(19.91±1.94)pg/ml,于第4天達(dá)到高峰,分別為

10、(41.33±3.08)pg/ml和(32.15±2.67)pg/ml。黑大蒜組于第4-5天顯著高于鮮大蒜組,P值分別為＜0.01和＜0.05。
　　 黑大蒜和鮮大蒜組TNF-α的分泌水平自末次處理后第1天開始就顯示高于正常對(duì)照組(13.54±1.91)pg/ml,均于第3天達(dá)高峰,分別為(53.98±6.97)pg/ml和(38.46±5.28)pg/ml。末次處理后第1-3天黑大蒜組顯著高于鮮大蒜組(P＜0.05)。

11、　　 黑大蒜組和鮮大蒜組的IL-17分泌水平均于未次處理后第5天達(dá)高峰,分別為(21.29±1.83)pg/ml和(14.55±2.59)pg/ml,前者顯著高于后者(P＜0.01)。二者均明顯高于正常對(duì)照組(11.75±0.81)pg/ml。
　　 黑大蒜組和鮮大蒜組的IL-4分泌水平于末次處理后1周與正常對(duì)照組(12.75±1.53)pg/ml比較均未見差異。末次處理后第3、4和5天雖顯示黑大蒜組(分別為10.33±0.7

12、8,10.85±1.49,11.44±2.99)pg/ml高于鮮大蒜組(分別為9.58±1.88,10.05±1.90,10.73±1.01)pg/ml,但二者之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1、黑大蒜增強(qiáng)NK細(xì)胞活性的能力要明顯優(yōu)于鮮大蒜。
　　 2、黑大蒜誘導(dǎo)NO水平產(chǎn)生明顯強(qiáng)于鮮大蒜,提示黑大蒜較鮮大蒜有更強(qiáng)的固有細(xì)胞免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)作用。
　　 3、兩種大蒜提取物均可刺激小鼠脾細(xì)胞產(chǎn)生IL-