黑大蒜提取物對小鼠過敏性哮喘模型的治療作用.pdf

1、前言:
　　 氣管哮喘是嚴(yán)重威脅人類健康的慢性呼吸系統(tǒng)疾病,全球約有3億患者。哮喘的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜,至今尚未完全闡明。近年來,隨著分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物等技術(shù)的廣泛應(yīng)用,對哮喘發(fā)病機(jī)制的研究已經(jīng)取得很大進(jìn)展。認(rèn)為其發(fā)生機(jī)制是Th1/Th2細(xì)胞系統(tǒng)功能失衡和Th2細(xì)胞優(yōu)勢分化,有利于Th2型細(xì)胞因子如IL-4的產(chǎn)生,誘導(dǎo)了IgE類抗體產(chǎn)生水平升高,肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞參與,表現(xiàn)以支氣管平滑肌收縮為主

2、的過敏反應(yīng)性癥狀。大蒜(garlic)為百合科蔥屬植物,性溫味辣,具有抗菌、消炎、祛風(fēng)、止痢、散癰消毒等功效。目前研究較多并且可以人工提取的有效成分是大蒜素(Allicin)。近年來日本學(xué)者發(fā)現(xiàn)在控制濕度和溫度的情況下,普通的鮮(白)大蒜經(jīng)過一定處理可由白色變成黑色(稱為黑大蒜)。Sasaki等和本實(shí)驗(yàn)室的研究已證明黑大蒜較鮮大蒜含有更多的S-烯丙基-L-半胱氨酸,對Th1型免疫應(yīng)答功能有促進(jìn)作用。為此,本實(shí)驗(yàn)通過建立小鼠哮喘模型,觀察

3、其經(jīng)黑大蒜提取物處理后,小鼠體內(nèi)細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4和IL-33、特異性抗體IgE及嗜酸性粒細(xì)胞含量的變化等情況,為證實(shí)黑大蒜提取物能夠抑制哮喘的形成及其作用的相關(guān)機(jī)制提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 實(shí)驗(yàn)方法:
　　 1、實(shí)驗(yàn)動物及主要試劑BALB/c小鼠。
　　 雞卵蛋白(OVA),氫氧化鋁,富馬酸酮替芬片,鮮大蒜和黑大蒜提取物,細(xì)胞因子IFN-γIL-4和IL-33檢測川ELISA試劑盒,IgE檢測試劑盒

4、,PBS溶液,Hinkelmann稀釋液。
　　 2、實(shí)驗(yàn)動物分組及處理
　　 實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為5組,即空白組、陰性組、藥物組,鮮大蒜組和黑大蒜組。各組小鼠(空白組以PBS代替)均分別于第0、7、14天腹腔注射毀敏液。第21-23天誘發(fā)哮喘,每天誘發(fā)一次。其中藥物組,鮮大蒜組和黑大蒜組均于每次誘發(fā)后分別立即給予腹腔注射富馬酸酮替酚溶液,鮮大蒜提取物溶液和黑大蒜提取物溶液進(jìn)行治療。陰性組于每次激發(fā)后腹腔注射PBS?？瞻捉M用

5、:PBS替代誘發(fā)液進(jìn)行同樣霧化吸入,然后腹腔注射PBS。
　　 3、樣品的采集與指標(biāo)檢測
　　 (1)小鼠血清中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4和IL-33的檢測末次處理后眼球取血,離心收集血清。采用ELISA法檢測血清中IFN-γ、IL-4和IL-33的水平。
　　 (2)小鼠血清中IgE的檢測末次處理后眼球取血,離心收集血清。采用ELISA法檢測血清中IgE的水平。
　　 (3)小鼠全血中嗜酸性粒細(xì)胞的檢

6、測末次處理后眼球取血,采用直接計(jì)數(shù)法檢測全血中嗜酸性粒細(xì)胞的水平。
　　 (4)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析,計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,單因素方差分析顯示組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義后,進(jìn)一步以q檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較,P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　 1、黑大蒜提取物對實(shí)驗(yàn)小鼠血清中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4和IL-33的影響
　　 各組小鼠經(jīng)處理

7、后,小鼠血清細(xì)胞因子水平結(jié)果為:①IFN-γ:陰性組水平顯著低于空白組水平,(P＜0.001),黑大蒜組和鮮大蒜組水平均明顯高于陰性組水平(P＜0.001),且黑大蒜組水平明顯高于鮮大蒜組水平(P＜0.001)。但均末完全恢復(fù)到空白組和藥物組水平。②IL-4:陰性組水平顯著高于空白組水平(P＜0.001)。黑大蒜組和鮮大蒜組水平均明顯低于陰性組水平(P＜0.001),且黑大蒜組水平明顯低于鮮大蒜組水平(P＜0.05)。黑大蒜組已基本恢復(fù)

8、劍空白組水平。黑大蒜組和鮮大蒜組水平與藥物組水平顯示幾乎同樣的結(jié)果。③IL-33:陰性組水平顯著高于空白組水平(P＜0.001)。黑大蒜組和鮮大蒜組水平均明顯低于陰性組水平(P＜0.01);黑大蒜組水平低于鮮大蒜組水平,但二者之間未見無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。黑大蒜組對IL-33產(chǎn)生的抑制作用不及藥物組(P＜0.05)。
　　 2、黑大蒜提取物對小鼠血清中IgE的影響
　　 各組小鼠經(jīng)處理后,小鼠血清中IgE水平的檢

9、測結(jié)果為:陰性組水平顯著高于空白組水平(P＜0.001),黑大蒜組和鮮大蒜組水平均明顯低于陰性組水平(P＜0.001),且黑大蒜組水平更明顯低于鮮大蒜組水平(P＜0.05)。黑大蒜組抑制IgE產(chǎn)生可達(dá)藥物組水平。
　　 3、黑大蒜提取物對小鼠全血中嗜酸性粒細(xì)胞的影響
　　 各組小鼠經(jīng)處理后,小鼠血清中嗜酸性粒細(xì)胞水平的檢測結(jié)果為:陰性組水平顯著高于空白組水平(P＜0.001),黑大蒜組和鮮大蒜組水平均明顯低于陰性組水平(

10、P＜0.001),且黑大蒜組水平更低于鮮大蒜組水平(P＜0.05),但未能降低到藥物組水平(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、黑大蒜提取物能夠使哮喘模型小鼠體內(nèi)TH1型細(xì)胞因子產(chǎn)生水平升高,Th2型細(xì)胞因子水平降低,糾正Th1/Th2型免疫應(yīng)答失衡。
　　 2、黑大蒜提取物能夠使特異性IgE類抗體產(chǎn)生減少,減輕哮喘癥狀。
　　 3、黑大蒜提取物可以下調(diào)哮喘模型小鼠全血中嗜酸性粒細(xì)胞水平,從而遏制小