視網(wǎng)膜色素上皮細胞培養(yǎng)上清液聯(lián)合視黃酸對骨髓間充質(zhì)干細胞的誘導(dǎo)分化作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討人類視網(wǎng)膜色素上皮(human retinal pigment epithelialium，HRPE)細胞培養(yǎng)上清液聯(lián)合全反視黃酸(all-trans Retinoid Acid，RA)對骨髓間充質(zhì)細胞(bone marrow stromal cells．BMSCs)誘導(dǎo)分化的影響。 方法實驗分3組：HRPE+RA+ BMSCs共培養(yǎng)組、HRPE+ BMSCs共培養(yǎng)組，和對照組(單獨BMSCs)。體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上

2、皮細胞(HRPE)和大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)，取第2代HRPE和第3代BMSCs接種于Transwell雙層培養(yǎng)板內(nèi)共培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化，采用免疫細胞化學(xué)染色、RT-PCR檢測膠質(zhì)源性纖維酸性蛋白(GFAP)、神經(jīng)元特異性標志物烯醇化酶(NSE)、光感受器特異性標志視紫質(zhì)(Rhodopsin)在誘導(dǎo)細胞中的表達。 結(jié)果:共培養(yǎng)兩周后的細胞置倒置相差顯微鏡下觀察：HRPE培養(yǎng)上清液+BMSCs+RA組

3、在誘導(dǎo)14天后，BMSCs出現(xiàn)較多的長突起，部分細胞發(fā)生遷移并相互之間建立突觸聯(lián)系。不加RA則分化細胞明顯較少，也少有建立突觸聯(lián)系的細胞；免疫細胞化學(xué)染色顯示：HRPE培養(yǎng)上清液+BMSCs+RA組不但能誘導(dǎo)BMSCs更多的表達GFAP(OD:0.347.±0.057)、NSE(OD:0.261±0.058)、部分細胞還表達光感受器細胞特異性標志Rhodopsin(OD:0.216±0.066)。將三種培養(yǎng)條件下所表達的陽性細胞分別進行

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