視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞培養(yǎng)上清液聯(lián)合視黃酸對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用.pdf

1、目的:探討人類視網(wǎng)膜色素上皮(human retinal pigment epithelialium，HRPE)細(xì)胞培養(yǎng)上清液聯(lián)合全反視黃酸(all-trans Retinoid Acid，RA)對骨髓間充質(zhì)細(xì)胞(bone marrow stromal cells．BMSCs)誘導(dǎo)分化的影響。 方法實驗分3組：HRPE+RA+ BMSCs共培養(yǎng)組、HRPE+ BMSCs共培養(yǎng)組，和對照組(單獨BMSCs)。體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上

2、皮細(xì)胞(HRPE)和大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)，取第2代HRPE和第3代BMSCs接種于Transwell雙層培養(yǎng)板內(nèi)共培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色、RT-PCR檢測膠質(zhì)源性纖維酸性蛋白(GFAP)、神經(jīng)元特異性標(biāo)志物烯醇化酶(NSE)、光感受器特異性標(biāo)志視紫質(zhì)(Rhodopsin)在誘導(dǎo)細(xì)胞中的表達(dá)。 結(jié)果:共培養(yǎng)兩周后的細(xì)胞置倒置相差顯微鏡下觀察：HRPE培養(yǎng)上清液+BMSCs+RA組

3、在誘導(dǎo)14天后，BMSCs出現(xiàn)較多的長突起，部分細(xì)胞發(fā)生遷移并相互之間建立突觸聯(lián)系。不加RA則分化細(xì)胞明顯較少，也少有建立突觸聯(lián)系的細(xì)胞；免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示：HRPE培養(yǎng)上清液+BMSCs+RA組不但能誘導(dǎo)BMSCs更多的表達(dá)GFAP(OD:0.347.±0.057)、NSE(OD:0.261±0.058)、部分細(xì)胞還表達(dá)光感受器細(xì)胞特異性標(biāo)志Rhodopsin(OD:0.216±0.066)。將三種培養(yǎng)條件下所表達(dá)的陽性細(xì)胞分別進(jìn)行