人胎盤(pán)絨毛膜間充質(zhì)干細(xì)胞在大鼠急性心肌梗死修復(fù)中的作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:人胎盤(pán)絨毛膜間充質(zhì)干細(xì)胞(Chorionic Mesenchymal stem cells,CMSCs)在體外適宜的培養(yǎng)條件下,容易擴(kuò)增、具有向多種細(xì)胞分化的能力,且易形成毛細(xì)血管樣結(jié)構(gòu),使之成為心肌修復(fù)組織工程理想的種子細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)在建立大鼠心肌梗死模型兩周后,經(jīng)開(kāi)胸在左心室壁梗死區(qū)及邊緣區(qū)注射人CMSCs,觀察其改善心功能的效果,進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。
　　方法:選取剖腹產(chǎn)足月胎兒的胎盤(pán),分離培養(yǎng)CMSCs細(xì)胞,流式細(xì)胞

2、儀檢測(cè)CMSCs細(xì)胞表型、特異性染色檢測(cè)CMSCs三系分化潛能、毛細(xì)血管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CMSCs體外成血管能力;實(shí)驗(yàn)采用結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支的方法建立大鼠急性心肌梗死模型,建模成功兩周后,開(kāi)胸在心室壁梗死區(qū)及邊緣區(qū)行細(xì)胞移植。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為四組:A(Sham組),僅開(kāi)胸經(jīng)冠狀動(dòng)脈下帶線不予結(jié)扎;B組(Control組),手術(shù)結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支;C組(BMSCs移植組),開(kāi)胸在心臟梗死區(qū)及邊緣區(qū)注射人BMSCs細(xì)胞;D組(CMSCs移植

3、組),開(kāi)胸在心臟梗死區(qū)及邊緣區(qū)注射人CMSCs細(xì)胞。細(xì)胞移植四周后,超聲心動(dòng)圖檢查觀察大鼠心臟功能的改善情況、免疫組化檢測(cè)移植GFP+的CMSCs細(xì)胞在大鼠局部心梗區(qū)分化為內(nèi)皮細(xì)胞及毛細(xì)血管的新生情況。
　　結(jié)果:1.流式細(xì)胞檢測(cè)表明,培養(yǎng)的P3代CMSCs高表達(dá)CD73、CD90、CD105以及VEGF受體1(KDR),不表達(dá)血系細(xì)胞標(biāo)志CDl4、CD34、CD45、HLA-DR。2.三系分化潛能測(cè)定表明CMSCs具有和BMSC

4、s相似的分化潛能,經(jīng)成骨誘導(dǎo)后von Kossa染色可見(jiàn)細(xì)胞呈集落生長(zhǎng)并出現(xiàn)鈣結(jié)節(jié);經(jīng)成脂肪誘導(dǎo),細(xì)胞內(nèi)有明顯的脂滴出現(xiàn),油紅O染色陽(yáng)性;經(jīng)成軟骨誘導(dǎo),甲苯胺藍(lán)染色可見(jiàn)細(xì)胞被染成藍(lán)色,同時(shí)CMSCs較BMSCs具有良好的成血管能力;3.Masson染色結(jié)果顯示:心梗區(qū)大量心肌細(xì)胞壞死,消失,被膠原纖維取代后而染成藍(lán)色,CMSCs細(xì)胞移植組梗死區(qū)膠原纖維和彈性纖維均明顯減少,僅在心外膜見(jiàn)到少量彈性纖維。4.免疫熒光顯微鏡觀察,細(xì)胞移植4周

5、后,局部心梗區(qū)仍有GFP+的CMSCs細(xì)胞存活。5.免疫組化染色結(jié)果表明,CMSCs細(xì)胞在大鼠心梗區(qū)分化并表達(dá)CD31及Ⅷ因子;6.心超結(jié)果提示,各組相比GFP+的CMSCs細(xì)胞移植組心臟左室舒張末內(nèi)徑(LVEDd)、左室收縮末內(nèi)徑(LVEDs)明顯減小,而心室射血分?jǐn)?shù)(EF)、縮短分?jǐn)?shù)(FS％)則明顯升高,心功能明顯改善,實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:(1)CMSCs具有和BMSCs相似的分化潛能,同時(shí)具