Notch及相關(guān)信號傳導(dǎo)體系對細(xì)胞增殖及分化的調(diào)控作用.pdf

1、目的：1、Notch信號通路、mTOR通路、Akt-ERK信號通路抑制劑及其聯(lián)合應(yīng)用后對初診白血病中干/祖細(xì)胞的克隆形成能力、自我更新能力、增殖能力、分化水平、分化方向、凋亡水平、細(xì)胞增殖周期以及白血病干細(xì)胞數(shù)量的影響。2、探討調(diào)控造血干細(xì)胞(HSC)、LSC自我更新及分化增殖的信號調(diào)節(jié)機制。3、探索最佳的信號通路抑制劑及其聯(lián)合應(yīng)用方案以最大限度的抑制白血病細(xì)胞增殖，清除LSC，促進正常HSC的自我更新。 方法：1、經(jīng)淋巴細(xì)胞分

2、離液分離初診患者骨髓中單個核細(xì)胞(MNC)與Notch信號通路抑制劑DAPT、mTOR通路抑制劑雷帕霉素、Akt-ERK信號通路抑制劑Ly294002分組共培養(yǎng)。2、干細(xì)胞培養(yǎng)測定克隆形成及自我更新能力，MTT檢測細(xì)胞增殖水平。瑞特一姬姆薩染色觀察細(xì)胞形態(tài)。3、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面CD34；CD38；CD123；CD117；CD11b；CD14的表達(dá)水平。4、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期。 結(jié)果：1、研究結(jié)果顯示DAPT、

3、雷帕霉素、Ly294002對細(xì)胞增殖、克隆形成及自我更新能力均有抑制作用(P<0.05有顯著統(tǒng)計學(xué)差異)。其中DAPT與Ly294002聯(lián)合應(yīng)用對細(xì)胞自我更新能力的抑制效果優(yōu)于單用DAPT。2、DAPT、雷帕霉素可減少CD34+細(xì)胞比例。DAPT、雷帕霉素、Ly294002均可顯著減少CD117+細(xì)胞比例，其中DAPT、雷帕霉素聯(lián)用效果優(yōu)于單用一種藥物。3、CD14、CD11b作為單核細(xì)胞標(biāo)志，未發(fā)現(xiàn)信號通路抑制劑的應(yīng)用能促進白血病細(xì)胞

4、向單核細(xì)胞系分化。4、DAPT的應(yīng)用可顯著減少CD34+CD38-、CD123+胞群的數(shù)量，而且DAPT與Ly294002聯(lián)合應(yīng)用的效果優(yōu)于單用DAPF。5、DAFT與Ly294002聯(lián)合應(yīng)用可誘導(dǎo)細(xì)胞早期凋亡及總凋亡增多。6、單用DAPT以及DAPT與Ly294002聯(lián)合應(yīng)用可減少S期細(xì)胞數(shù)量。 結(jié)論：1、Notch、Akt-ERK、mTOR信號通路對白血病細(xì)胞，甚至是白血病干細(xì)胞的增殖、克隆形成、自我更新、凋亡、細(xì)胞周期、原