外周血淋巴細胞HLA-I基因表達與移植后機體免疫狀態(tài)的關系探討.pdf

1、目的：通過建立檢測HLA-A、-B非多態(tài)位點表達的逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)方法，并結合CD4/CD8比值和免疫抑制劑(FK506)血藥濃度，研究外周血淋巴細胞(PBL)HLA-Ⅰ作為移植后免疫狀態(tài)，尤其是早期排異反應評估指標的可行性。 方法：依據(jù)GenBank中人HLA-IcDNA序列，根據(jù)HLA-A基因外顯子4、5中的保守序列自主設計、篩選引物，采用RT-PCR一步法擴增HLA-AmRNA。收集30例腎移植患者術前

2、及術后3個月內(nèi)的抗凝外周血(隨訪10例)，并設立正常對照61例，提取外周血淋巴細胞，RT-PCR擴增HLA-AmRNA，瓊脂糖凝膠電泳結果采用Bandscan軟件分析相對灰度值，半定量HLA-A的基因表達。同時參照文獻合成HLA-B特異性引物，隨機選擇5例隨訪病人與20例正常對照，RT-PCR擴增HLA-BmRNA，以觀察HLA-A與HLA-B測定符合率。并采用流式細胞術、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)連續(xù)監(jiān)測術后CD4/CD8比值及FK

3、506血藥濃度。 結果： 1.腎移植患者HLA-AmRNA陽性表達率為29％(20/70)，較正常對照表達(82％，50/61)明顯降低(P＜0.001)。10例連續(xù)監(jiān)測患者中有2例在監(jiān)測期間發(fā)生急性排斥反應，排斥期間患者的HLA-A表達升高。不同患者移植后同一時期HLA-A表達存在個體差異，與有無感染、排斥反應有關。 2.HLA-BmRNA在隨訪病例中表達明顯低于正常對組(P＜0.05)。與相應的HLA-A表達

4、比較，二者具有一致性(P＞0.05)。 3.隨訪移植患者的外周血T淋巴細胞亞群與正常對照間的差異具有顯著性(P＜0.01)，各亞群的百分數(shù)和CD4/CD8比值較正常對照組明顯降低。CD4/CD8比值與HLA-A間存在一定的相關關系(P＜0.05)。 4.隨訪移植患者的FK506血藥濃度與HLA-A表達間存在一定的相關關系(P＜0.05)。 結論： 1.成功建立了快速檢測HLA-Ⅰ基因的RT-PCR方法。