日本血吸蟲(chóng)免疫球蛋白結(jié)合蛋白質(zhì)組的研究.pdf

1、由血吸蟲(chóng)引起的血吸蟲(chóng)病是對(duì)人類(lèi)健康威脅僅次于瘧疾的全球第二大寄生蟲(chóng)病，其流行于全球78個(gè)國(guó)家和地區(qū)，至少2.61億人和大量牲畜被感染，受威脅人口逾7億（世界衛(wèi)生組織，2015年1月）。在六種可以感染人的血吸蟲(chóng)中，只有日本血吸蟲(chóng)在我國(guó)流行，但它卻是所有血吸蟲(chóng)中生物學(xué)特性最復(fù)雜、危害最嚴(yán)重、防治難度最大的一種，也是唯一一種人獸共患寄生蟲(chóng)。吡喹酮是治療血吸蟲(chóng)病的唯一特效藥，但無(wú)法防止反復(fù)感染的弊端和產(chǎn)生抗藥性的風(fēng)險(xiǎn)一直提醒著人們單一藥物無(wú)法從

2、根本上控制疫情，而且至今為止尚無(wú)可成功防治血吸蟲(chóng)病的疫苗問(wèn)世。多年來(lái)針對(duì)血吸蟲(chóng)蟲(chóng)體與宿主免疫系統(tǒng)相互接觸的結(jié)構(gòu)而設(shè)計(jì)的疫苗研究均以失敗而告終。
　　日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)寄生于終宿主的肝門(mén)靜脈、腸系膜靜脈，直接與宿主的免疫系統(tǒng)相接觸，但它們的已知最長(zhǎng)寄生年限卻長(zhǎng)達(dá)46年之久，說(shuō)明其具有一整套成功逃避宿主免疫識(shí)別的策略。包括抗原變異、表膜偽裝等在內(nèi)的寄生蟲(chóng)的免疫逃避假說(shuō)在多年前即被研究者們所提出，但具體機(jī)制直至今日仍尚不清楚。
　　本

3、課題組之前的研究發(fā)現(xiàn)，Sjc23這一曾被寄予厚望的疫苗候選抗原與副肌球蛋白一樣可結(jié)合人非特異性IgG的Fc片段，實(shí)際是一個(gè)主動(dòng)參與免疫調(diào)節(jié)的免疫逃避相關(guān)分子，其本身不適宜作為疫苗抗原。因此，日本血吸蟲(chóng)還有哪些蛋白質(zhì)利用類(lèi)似的機(jī)制參與免疫逃避一直是本課題組關(guān)注的問(wèn)題。在本研究中，我們首先使用免疫熒光的方法證明日本血吸蟲(chóng)蟲(chóng)體表面具有吸附宿主非特異性免疫球蛋白的能力。其次使用固定化人免疫球蛋白G、M、E為誘餌蛋白釣取了成蟲(chóng)蛋白質(zhì)中的可結(jié)合組分

4、并利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS/MS)對(duì)蛋白質(zhì)序列進(jìn)行了鑒定，獲得了由437個(gè)蛋白質(zhì)組成的日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)免疫球蛋白結(jié)合蛋白質(zhì)組，其中與人IgG結(jié)合的蛋白有243個(gè)，與人IgM結(jié)合的蛋白有210個(gè)，與人IgE結(jié)合的蛋白有134個(gè)，且與IgG和IgM結(jié)合的蛋白質(zhì)組中過(guò)半蛋白都具有雙重結(jié)合能力。我們對(duì)所得到的蛋白質(zhì)進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，基因本體(GO)分析發(fā)現(xiàn)其中相當(dāng)一部分蛋白質(zhì)與蟲(chóng)體表膜相關(guān)，表達(dá)譜芯片數(shù)據(jù)分析表明其中多數(shù)蛋白

5、質(zhì)在終宿主體內(nèi)寄生期高表達(dá)，序列分析發(fā)現(xiàn)了免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域、EF-hand結(jié)構(gòu)域等具有代表性的序列特征。我們挑選出十個(gè)各具代表性的蛋白質(zhì)并對(duì)它們與五種人免疫球蛋白和兩種家畜IgG的結(jié)合性能進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)它們都結(jié)合人IgG的Fc片段，而具有IgG、IgM雙重結(jié)合能力的蛋白質(zhì)用各異的方式結(jié)合兩種免疫球蛋白。此外，本研究發(fā)現(xiàn)C1q結(jié)合蛋白(C1qBP)具有比結(jié)合人C1q更強(qiáng)的IgG結(jié)合能力，而且人IgG可顯著抑制人C1q與C1qBP的結(jié)合，