白楊素抗血小板及抗血栓作用的研究.pdf

1、本文主要從以下幾個方面展開論述:
　　第一部分 白楊素對小鼠血小板作用研究
　　目的：血小板在病理性條件下不適當的活化，容易造成血栓，誘發(fā)心肌梗死和缺血性中風等心腦血管栓塞疾病。初步研究表明白楊素具有抗血小板作用，但并未深入研究其作用機制。本實驗主要研究白楊素對小鼠血小板活化，聚集，粘附等功能的影響及其潛在機制。
　　方法：采用血小板聚集儀觀察白楊素對不同激動劑（ADP，膠原，凝血酶和血栓素類似物U46619）誘導的小

2、鼠血小板聚集的影響，采用流式細胞術檢測白楊素對血小板激活時P-selectin表達和JON/A與αⅡbβ3結合率的影響。采用熒光顯微鏡觀察白楊素對血小板在固化膠原上的黏附和在固化纖維蛋白原上的擴展等功能的影響。觀察白楊素對斑塊回縮的影響。采用蛋白印跡法研究白楊素對血小板的主要信號通路蛋白的影響。
　　結果：①白楊素抑制ADP、膠原、凝血酶和U46619誘導的血小板聚集。②白楊素抑制膠原誘導的血小板活化和顆粒釋放。③白楊素抑制血小板

3、在固化膠原上的黏附數目并減少單個血小板擴展面積。白楊素減少血小板在固化纖維蛋白原上的擴展。④蛋白印跡分析表明，白楊素抑制PLCγ2的磷酸化和降低PKC的活性。同時，白楊素抑制Akt磷酸化和MAPK通路中的ERK1/2磷酸化。PI3K廣譜抑制劑LY294002與白楊素聯(lián)用增強對血小板聚集的抑制作用。
　　結論：白楊素抗小鼠血小板作用主要是由于抑制血小板顆粒釋放并抑制PI3K/Akt-GSK3β/eNOS和Syk-PLCγ2-PKC信

4、號通路。
　　第二部分 白楊素對正常人血小板作用研究
　　目的：為了進一步驗證白楊素的抗血小板作用，采用正常人血小板進行研究，觀察其對正常人血小板功能影響，并試圖尋找其抗血小板作用的相關作用機制。
　　方法：采用血小板聚集儀觀察白楊素對不同激動劑（ADP，膠原，凝血酶，U46619）誘導的血小板聚集的影響，采用流式細胞術檢測白楊素對血小板激活時P-selectin的表達和PAC-1與αIIbβ3的結合率的影響。采用熒光

5、顯微鏡觀察白楊素對血小板在固化纖維蛋白原上的粘附和擴展等功能的影響。觀察白楊素對斑塊回縮的影響。采用蛋白印跡法檢測白楊素對血小板的主要信號通路蛋白以及血小板“由外向內”信號轉導的影響。
　　結果：①白楊素抑制ADP、膠原、凝血酶和U46619誘導的人血小板聚集。②白楊素抑制膠原誘導的血小板活化和顆粒釋放。③白楊素減少血小板在固化纖維蛋白原上的黏附和擴展。④蛋白印跡分析表明白楊素可抑制PLCγ2的磷酸化和降低PKC的活性。同時，白楊

6、素抑制Akt和GSK3β磷酸化和MAPK通路中的ERK1/2磷酸化。PI3K廣譜抑制劑LY294002或SFKs廣譜抑制劑PP2與白楊素聯(lián)用時，均增強對血小板的聚集的抑制作用。白楊素可以抑制介導“由外向內”信號轉導過程中的FcγRIIa, Akt和GSK3β磷酸化。
　　結論：白楊素抗人血小板作用主要是由于抑制血小板顆粒釋放并抑制PI3K/Akt-GSK3β和SFKs-PLCγ2-PKC通路信號轉導，且抑制血小板“由內向外”和“由

7、外向內”的信號轉導。
　　第三部分 白楊素對整體動物血栓與凝血系統(tǒng)的作用研究
　　目的：研究白楊素對小鼠體內血栓的作用效果。
　　方法：觀察白楊素對膠原+腎上腺素(collagen+ epinephrine)引起的小鼠急性肺栓塞的作用及相應肺組織病理情況。觀察白楊素對小鼠斷尾出血時間的影響。觀察體內使用白楊素對血小板聚集的影響。觀察白楊素對凝血系統(tǒng)的影響。
　　結果：①白楊素可以顯著降低膠原+腎上腺素引起小鼠急性