自噬激動劑雷帕霉素對傷寒沙門菌質(zhì)粒與巨噬細(xì)胞相互作用的影響.pdf

1、目的：研究自噬激動劑雷帕霉素(RAPA)對傷寒沙門菌質(zhì)粒pRST98與巨噬細(xì)胞相互作用的影響，為探討自噬和pRST98在沙門菌致病中的作用機(jī)制提供理論和實驗依據(jù)。
　　 方法：以攜帶pRST98的傷寒沙門菌ST8，無質(zhì)粒的傷寒沙門菌ST10作受試菌，攜帶一分子量為100 Kb毒力質(zhì)粒的鼠傷寒沙門菌標(biāo)準(zhǔn)毒株SR-11作陽性對照。用Giemsa染色法和系列稀釋法測定RAPA的最適工作濃度；分別用加入和未加入RAPA的RPMI1640

2、培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞J774A.l過夜后，與受試菌共作用，于O點(diǎn)、2、4、8、12和24 h用Western blot檢測自噬蛋白Beclin-I的表達(dá)；PI染色后流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測細(xì)胞凋亡sub-G1峰；透射電鏡觀察J774A.1細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變。
　　 結(jié)果：RAPA最適工作濃度為25μg/ml:Beclin-1表達(dá)量在2h時SR-11組

3、以上規(guī)律；細(xì)胞凋亡sub-G1峰顯示SR-11組>ST8組>STl0組，RAPA干預(yù)后ST8組、SR-11組凋亡率下降，而STl0組凋亡率升高(P<0.05)；電鏡下2～4h可見部分細(xì)菌被雙層膜包裹，12h可見凋亡改變，RAPA干預(yù)后，ST8組細(xì)胞破壞減輕，而ST10組加重。
　　 結(jié)論：上述結(jié)果表明傷寒沙門菌質(zhì)粒pRST98與細(xì)胞自噬有關(guān)，在早期可抑制自噬，其誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡可被自噬激動劑RAPA減輕，而RAPA能使不攜帶p