中國1995～2004年雞傳染性支氣管炎病毒的分離鑒定及致病性研究.pdf

1、本研究中從1995～2004年中國疑似IBV感染的產(chǎn)蛋雞群和肉雞群分離了21株雞傳染性支氣管炎病毒，并對這些毒株的致病性進行研究。 將有病變的腎臟、腺胃或輸卵管病料處理后，接種9～11日齡的SPF雞胚，72h后收集尿囊液，經(jīng)過2～7代盲傳。每代尿囊液經(jīng)2％的磷鎢酸鈉負染色后在電鏡下觀察病毒粒子的形態(tài)特征，并用紅細胞凝集的方法檢測尿囊液中病毒的血凝活性。應(yīng)用9～11日齡SPF雞胚進行病毒滴度的測定，并根據(jù)該滴度研究每株病毒對10只

2、15日齡的SPF雞的致病性(通過滴鼻的方法進行攻毒)。攻毒后，每天觀察雞的臨床癥狀，剖檢病死雞并觀察病理變化；攻毒后每4d采集口咽拭子和血樣，連續(xù)采7次樣。用采集的口咽拭子接種接胚，分離病毒并用RT-PCR的方法檢測尿囊液中的IB病毒；血清用間接ELISA的方法檢測IBV特異的抗體。 將病料接種雞胚后，不同病毒在2～7代之間，雞胚在接種后2～7d內(nèi)出現(xiàn)卷曲、侏儒胚等IBV致雞胚特征性的病變。在電鏡下可以見到典型的冠狀病毒粒子，未

3、見到其它病毒粒子。所見病毒粒子呈圓形，有稀疏排列的纖突。未經(jīng)胰酶處理的尿囊液對SPF雞紅細胞作用沒有凝集作用。攻毒后，CK/CH/LHN/00Ⅰ接種雞僅有30％的出現(xiàn)輕微的臨床癥狀，其它毒株均引起嚴重的臨床癥狀，表現(xiàn)為病雞呼吸困難、羽毛松亂、精神沉郁。攻毒后第3d，部分病毒接種雞開始死亡，死亡時間在2～9d不等。除CK/CH/LHN/00Ⅰ和CK/CH/LSD/03Ⅰ外，其它19個毒株造成不同程度的雞死亡，其中3個毒株引起的死亡率在20

4、％以下；6個毒株引起的死亡率在20％～30％；10個毒株引起的死亡率大于30％，其中CK/CH/LTJ/95Ⅰ和CK/CH/LJL/04Ⅰ兩個毒株引起100％的死亡率。多數(shù)病死雞剖檢后，肉眼可見到氣管出血、水腫，盲腸扁桃體等器官出血。所有死亡雞只均表現(xiàn)腎臟腫大、蒼白，腎臟和輸尿管內(nèi)有白色的尿酸鹽沉積，呈典型的“花斑腎”。隨著病程延長，腎臟腫大更加明顯。5株從現(xiàn)地病雞的腫大腺胃組織分離到的IBV，攻毒后未復(fù)制出現(xiàn)地病雞的病變，未見到明顯的

5、腺胃腫大等病變，但表現(xiàn)明顯的腎臟病變。此外，IBVCK/CH/LHN/00Ⅰ只引起雞出現(xiàn)輕微的的臨床癥狀，未造成死亡。1株從輸卵管分離的IBV也同樣引起明顯的腎臟病變。可見，本研究從中國近10年來，在我國分離到的IBV毒株主要為致腎臟病性型IBV(腎型IBV)。但不同毒株對SPF雞的致病力強弱不一，主要為強致病力毒株。 用這些毒株攻毒后采集的口咽拭子接種雞胚，48h后收集尿囊液，用RT-PCR的方法檢測尿囊液中IBV病毒。第4d

6、和第8d采集的口咽拭子都檢測到病毒的有9個毒株；只有第4d采集的口咽拭子檢測到病毒的有6個毒株；只有第8d采集的口咽拭子檢測到病毒的有2個毒株；只有第4d和第12d采集的口咽拭子檢測到病毒的有1個毒株；第4d、第8d和第12d采集的口咽拭子都檢測到病毒的有2個毒株；有1個毒株所有采集的口咽拭子都沒有檢測到病毒。可見從氣管中排毒的時間主要在攻毒后前8d，到攻毒后第12d，只有少數(shù)毒株攻毒的雞仍可排毒，攻毒后第16d停止排毒。 攻毒

7、后每4d采集的血樣用ELISA的方法檢測血清中的抗體。攻毒后第4d采集的血樣有3個毒株攻毒的雞分別有3只(3/7)、3只(3/10)和2只(2/10)雞抗體出現(xiàn)陽轉(zhuǎn)，其余血樣均為陰性；攻毒后第8d采集的血樣，僅4個毒株攻毒的雞分別有1只(1/5)、5只(5/9)、5只(5/9)和4只(4/8)為陰性，其余均為陽性；從第12d到第28d，除用CK/CH/LHLJ/04Ⅺ攻毒的雞在攻毒后第12d和第16d各有1只(5/6)抗體為陰性外，其余