缺氧條件下As-,2-O-,3-對(duì)肝癌HepG-,2-細(xì)胞表達(dá)VEGF和凋亡的影響.pdf

1、目的：研究常氧和缺氧條件下不同濃度As2O3對(duì)肝癌HpG2細(xì)胞表達(dá)VEGF和凋亡的影響，并進(jìn)一步探討其可能的作用機(jī)制。 方法：在肝癌HepG2細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，實(shí)驗(yàn)分兩部分。實(shí)驗(yàn)一，常氧和缺氧條件下不同濃度As2O3對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞表達(dá)VEGF和凋亡的影響，分四組：常氧組；缺氧組：不同濃度（2、4、8μmol/L）As2O3組；缺氧（C0Cl2）+不同濃度As2O3組。用四甲基偶氮唑鹽（MTT）比色法測(cè)定常氧利缺氧條件下不同

2、濃度As2O3對(duì)肝癌HpG2細(xì)胞生長增殖的影響；AnnexinV/PI雙染色法流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡；熒光免疫組織化學(xué)法測(cè)VEGF蛋白表達(dá)，RT-PCR測(cè)VEGFmRNA表達(dá)。實(shí)驗(yàn)二，常氧和缺氧條件下4μmol/L As2O3對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞VEGF表達(dá)、HIF-1α表達(dá)、ROS水平及凋亡的影響，分五組：常氧組：缺氧組；As2O3組；缺氧+As2O3組；缺氧+As2O3+Mn（Ⅲ）TBAP組。AnnexinV/PI雙染色法流式細(xì)

3、胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡；激光共聚焦顯微鏡熒光染色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS的變化；免疫組織化學(xué)法檢測(cè)VEGF、HIF-1α蛋白表達(dá)；RT-PCR檢測(cè)VEGFmRNA、HIF-1αmRNA表達(dá)。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)一：（1）常氧和缺氧條件下不同濃度As2O3對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞生長增殖的影響：不同濃度As2O3（2、4、8μmol/L）作用丁肝癌HpG2細(xì)胞均抑制細(xì)胞增殖，作用48h抑制率分別（22.101±2.243）％、（33.286±2.12

4、7）％、（45.360±3.089）％且均高于常氧組（p<0.05），細(xì)胞增殖抑制率隨As2O3濃度的增加及作用時(shí)間（24、48、72h）的延長而增加（p<0.05）。同一濃度As2O3相同作用時(shí)間在缺氧條件下對(duì)細(xì)胞的抑制率高于常氧條件下（p<0.05）。（2）常氧和缺氧條件下不同濃度As2O3對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響：各實(shí)驗(yàn)組VEGF的表達(dá)均高于常氧組（p<0.01），其中As2O3濃度為4μmol/L時(shí)VEGF的表達(dá)最

5、高，相同濃度的As2O3在缺氧條件下較常氧條件下更能促進(jìn)VEGF的表達(dá)（3）常氧和缺氧條件下不同濃度As2O3對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞凋亡的影響：一定濃度As2O3能明顯促進(jìn)肝癌HepG2細(xì)胞的凋亡，且早期凋亡率及總凋亡率隨As2O3濃度的增加及作用時(shí)間的延長而升高（p<0.05），相同濃度的As2O3、相同作用時(shí)間缺氧條件下促細(xì)胞凋亡作用高于常氧條件（p<0.05）。實(shí)驗(yàn)二：（1）常氧和缺氧條件下4μmol/L As2O3對(duì)肝癌HepG2

6、細(xì)胞VEGF表達(dá)、HIF-1α表達(dá)影響：各實(shí)驗(yàn)組VEGF表達(dá)、HIF-1α表達(dá)均高于常氧組（p<0.05），缺氧+As2O3組高于缺氧+As2O3+Mn（Ⅲ）TBAP組且均高于缺氧組和As2O3組（p<0.05）。（2）對(duì)ROS水平的影響：各實(shí)驗(yàn)組ROS水平均高于常氧組（p<0.05），缺氧+As203組高于缺氧+As2O3+Mn（Ⅲ）TBAP組且均高于缺氧組和As2O3組（p<0.05）。（3）對(duì)凋亡的影響：各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞早期凋亡率均高

7、于常氧組（p<0.05），缺氧+As2O3組高于缺氧+As2O3+Mn（Ⅲ）TBAP組且均高于缺氧組和As2O3組（p<0.05）。 結(jié)論：（1）缺氧條件下不同濃度As2O3對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞生長增殖的抑制和促VEGF的表達(dá)、細(xì)胞凋亡作用較常氧條件下更為明顯。（2）缺氧和As2O3對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞生長增殖、凋亡和促VEGF具有協(xié)同作用。（3）上述協(xié)同作用與ROS水平HIF-1α表達(dá)水平密切相關(guān)，可能是由于缺氧和As2O3作