As-,2-O-,3-與Aspirin聯(lián)合應(yīng)用對(duì)SGC-7901細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的:觀察As<,2>O<,3>與Aspirin單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞抑制生長(zhǎng)、誘導(dǎo)凋亡的生物學(xué)效應(yīng)，探討As<,2>O<,3>與Aspirin兩種藥物是否具有協(xié)同抗癌效應(yīng)，聯(lián)合應(yīng)用是否可以降低兩藥的用量，初步探討As<,2>O<,3>與Aspirin抑制胃癌生長(zhǎng)的可能機(jī)制，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。 方法:細(xì)胞培養(yǎng)：人胃癌SGC-7901細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含有10％新生牛血清、100U/ml青霉素和100μ

2、g/ml鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)液中，在37℃，5％CO<,2>及飽和濕度培養(yǎng)箱中貼壁培養(yǎng)。將As<,2>O<,3>與Aspirin用培養(yǎng)液稀釋成終濃度為As<,2>O<,3>(1、2、4、8μmol/L)；Aspirin(0.5、1、2、4mmol/L)以及兩者聯(lián)合終濃度As<,2>O<,3>(2μmol/L)+Aspirin(1mmol/L)，As<,2>O<,3>(2μmol/L)+Aspirin(0.5mmol/L)，As

3、<,2>O<,3>(1μmol/L)+-Aspim(1mmol/L)，作用于SGC-7901細(xì)胞后72小時(shí)，采用MTT法檢測(cè)兩藥單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用后腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率(IR)；流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的改變；HE染色、光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；免疫細(xì)胞化學(xué)染色(SP法)檢測(cè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子IKKα、COX-2、VEGF及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)：Western blot檢測(cè)IKKα、IкBα、NF-кB、C

4、OX-2、VEGF蛋白表達(dá)的改變。 結(jié)果: 1．As<,2>O<,3>及Aspirin均可抑制胃癌細(xì)胞SGC-7901的生長(zhǎng)，兩藥單獨(dú)作用于SGC-7901細(xì)胞后48小時(shí)，8μmol/L As<,2>O<,3>組及4mmol/L Aspirin組細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率分別為40.56％、20.41％，與陰性對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；作用后72小時(shí)，4μmol/LAs<,2>O<,3>組(31.04％)及2m

5、mol/L Aspirin組(16.11％)與陰性對(duì)照組相比，抑制率的差異亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；2μmol/LAs<,2>O<,3>+1mmol/L Aspirin聯(lián)合用藥組的生長(zhǎng)抑制率為24.19％，與陰性對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，并且與2μmol/L As<,2>O<,3>(5.96％)及1mmol/L Aspirin(4.86％)單用藥組相比，抑制率的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；后兩組單用藥

6、組與對(duì)照組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2．FCM檢測(cè)結(jié)果顯示陰性對(duì)照組SGC-7901細(xì)胞的凋亡率(AR)是1.55％，2μmol/L As<,2>O<,3>組、1mmol/L Aspirin組及2μmol/LAs<,2>O<,3>與1mmol/L Aspirin聯(lián)合應(yīng)用組的AR分別是1.81％、1.64％、19.01％，2μmol/LAs<,2>O<,3>組和1mmol/L Aspirin組與陰性對(duì)照組AR的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而2μ

7、mol/LAs<,2>O<,3>與1mmol/L Aspirin聯(lián)合應(yīng)用組的AR與陰性對(duì)照組、2μmol/L As<,2>O<,3>組及1mmol/L Aspirin組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；4μmol/L As<,2>O<,3>將SGC-7901細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯在G<,2>/M期，2mmol/L Aspirin使其阻滯在G<,0>/G<,1>期，聯(lián)合用藥組細(xì)胞G<,0>/G<,1>期、G<,2>/M期比例均增加，S

8、期細(xì)胞比例減少。 3．隨著實(shí)驗(yàn)組給藥濃度的增加或聯(lián)合應(yīng)用兩藥，HE染色觀察到細(xì)胞變小變圓，有凋亡小體形成，胞漿中出現(xiàn)空泡，部分細(xì)胞脫落漂浮于培養(yǎng)基中，隨藥物劑量增大，作用時(shí)間延長(zhǎng)，上述現(xiàn)象越加明顯。 4．免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示：隨著藥物濃度的增加，胃癌細(xì)胞中IKK、COX-2、VEGF的表達(dá)率逐漸減少；Bax的表達(dá)率逐漸增高，Bcl-2表達(dá)率逐漸減少，2μmol/L As<,2>O<,3>+1mmol/L Aspiri

9、n聯(lián)合用藥組與陰性對(duì)照組、2μmol/L As<,2>O<,3>組及1mmol/L Aspirin組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 5．Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示As<,2>O<,3>與Aspirin作用后，胃癌細(xì)胞總蛋白中IKKα、COX-2、VEGF蛋白的含量降低；非磷酸化IкBα蛋白的含量增高，核蛋白中NF-кB的含量均降低。2μmol/L As<,2>O<,3>+1mmol/L Aspirin聯(lián)合用

10、藥組與陰性對(duì)照組、2μmol/LAs<,2>O<,3>組及1mmol/L Aspirin組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論 1．As<,2>O<,3>與Aspirin聯(lián)合應(yīng)用具有較明顯的協(xié)同作用，聯(lián)合應(yīng)用可以降低兩藥的用量。 2．As<,2>O<,3>與Aspirin均可通過(guò)抑制Bcl-2的表達(dá)、促進(jìn)Bax的表達(dá)，升高Bax/Bcl-2比率，抑制SGC-7901細(xì)胞的增殖，促進(jìn)其凋亡。 3