As-,2-O-,3-誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡的氧化還原調(diào)節(jié)研究.pdf

1、目的：檢測三氧化二砷(As2O3)對人乳頭瘤病毒(HPV)陽性宮頸癌HeLa細(xì)胞和胰腺癌AsPC-1細(xì)胞(HPV陰性)的凋亡誘導(dǎo)作用和它對細(xì)胞內(nèi)H2O2水平的影響，探討As2O3誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制；驗(yàn)證HPV感染與As2O3誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的關(guān)系；用As2O3和維生素C誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡，探討維生素C是否能增強(qiáng)As2O3誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡，以及它對細(xì)胞內(nèi)H2O2水平的影響；探討單獨(dú)維生素C是否能誘導(dǎo)實(shí)體腫瘤宮頸癌H

2、eLa細(xì)胞凋亡，及其相關(guān)作用機(jī)制，為臨床治療宮頸癌提供新思路。 方法：采用不同濃度的As2O3處理HeLa細(xì)胞和AsPC-1細(xì)胞不同時(shí)段，用MTT法、光學(xué)顯微鏡觀察、電鏡、流式細(xì)胞儀等方法檢測As2O3對HeLa細(xì)胞和AsPC-1細(xì)胞生長抑制作用和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用；用不同濃度的As2O3處理細(xì)胞2h、5h、8h、12h、24h后，用DCFH-DA標(biāo)記檢測細(xì)胞內(nèi)的H2O2水平。采用維生素C和As2O3聯(lián)合或不同濃度的維生素C單獨(dú)處

3、理HeLa細(xì)胞不同時(shí)段觀察凋亡情況，測定細(xì)胞內(nèi)的過氧化氫(H2O2)水平的變化情況變化。 結(jié)果：2μmol/LAs2O3處理HeLa細(xì)胞48h后細(xì)胞的生長受到明顯抑制，表現(xiàn)出細(xì)胞凋亡的特征，隨著As2O3濃度的增加和作用時(shí)間的延長效果更加明顯。而1μmol/LAs2O3處理AsPC-1細(xì)胞24h即呈現(xiàn)明顯的生長抑制和凋亡特征。As2O3處理HeLa細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)H2O2的水平比對照組明顯升高，持續(xù)一段時(shí)間后又下降，并呈現(xiàn)明顯的劑量

4、依賴性。As2O3同樣影響AsPC-1細(xì)胞內(nèi)H2O2的水平。維生素C和As2O3聯(lián)合處理HeLa細(xì)胞較單一As2I3處理HeLa細(xì)胞的凋亡率增加，且出現(xiàn)凋亡的時(shí)間提早。聯(lián)合用藥48h后檢測細(xì)胞內(nèi)H2O2的水平，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)H2O2的水平比對照組低。較高濃度維生素C(0.5mmol/L)單獨(dú)處理HeLa細(xì)胞24h后細(xì)胞的生長也受到抑制，表現(xiàn)出細(xì)胞凋亡的特征，且MTT檢測和流式細(xì)胞分析的結(jié)果顯示有劑量和時(shí)間依賴性。檢測細(xì)胞內(nèi)H2O2水平，發(fā)現(xiàn)

5、維生素C也能提高HeLa細(xì)胞內(nèi)H2O2水平，且呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性。 結(jié)論：1、As2O3可抑制HPV陽性的人宮頸癌HeLa細(xì)胞和HPV陰性的人胰腺癌AsPC-1細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其凋亡，這與上調(diào)細(xì)胞內(nèi)H2O2水平有關(guān)。2、H2O2積累是As2O3誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡途徑中的早期事件。3、As2O3誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡在不同細(xì)胞系機(jī)制可能不一樣，As2O3下調(diào)HeLa細(xì)胞HPV致瘤蛋白表達(dá)可能是As2O3誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的下游事件。4、小劑量維生素