主養(yǎng)草魚池塘微生物群落結(jié)構(gòu)分析及嗜水氣單胞菌拮抗菌篩選.pdf

1、微生物是水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)的重要組成部分，在水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的起著十分重要的作用。作為生產(chǎn)者，微生物可以利用光能或者無機(jī)物制造有機(jī)物，為水產(chǎn)養(yǎng)殖動物提供營養(yǎng)物質(zhì)。作為分解者，微生物可以除去水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中的殘餌、糞便、動植物殘?bào)w等，推動了水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的物質(zhì)循環(huán)和能量流動。此外，水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中也存在著許多致病微生物和諸多益生菌。所以，了解水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中的微生物群落結(jié)構(gòu)，可以為監(jiān)測養(yǎng)殖系統(tǒng)的生態(tài)狀況、開發(fā)新的微生物資源、養(yǎng)殖病害的防治提供理論基礎(chǔ)。

2、
　　本研究首先采用平板菌落計(jì)數(shù)法分析了草魚養(yǎng)殖水體異養(yǎng)細(xì)菌數(shù)量周年變化，結(jié)果表明，養(yǎng)殖水體中異養(yǎng)細(xì)菌數(shù)量呈季節(jié)性變化，6月份和8月份水體中異養(yǎng)細(xì)菌數(shù)量最高，10月份次之，4月份和12月份最低。其次采用高通量測序技術(shù)分析了草魚養(yǎng)殖水體微生物群落結(jié)構(gòu)，結(jié)果表明，草魚養(yǎng)殖水體微生物群落結(jié)構(gòu)也隨季節(jié)發(fā)生變化，在門水平上，不同月份共有的優(yōu)勢菌為變形菌門（Proteobacteria）、放線菌門（Actinobacteria）、擬桿菌門（B

3、acteroidetes）、浮霉菌門（Planctomycetes）。厚壁菌門（Firmicutes）只在4月份和6月份出現(xiàn)，綠彎菌門（Chloroflexi）只在6月份出現(xiàn)，疣微菌門（Verrucomicrobia）除了4月份其它月份都出現(xiàn)。在屬水平上，4月主要的優(yōu)勢菌為不動桿菌屬（Acinetobacter）、寡養(yǎng)單胞菌屬（Stenotrophomonas）、假單胞菌屬（Pseudomonas），6月份為Ilumatobacter、

4、Spartobacteria，8月份為食酸菌屬（Acidovorax）、Candidatus Pelagibacter，10月份為 Ilumatobacter、Steroidobacter，12月份為Candidatus Pelagibacter、Orientia。通過進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，4月份水體微生物群落結(jié)構(gòu)與其它月份相差較大。6月和8月微生物群落結(jié)構(gòu)相似度最高，6月和10月相似度次之，10月和12月相似度最小。微生物多樣性10月份最高

5、，8月份最低。
　　此外，為了研究草魚養(yǎng)殖環(huán)境中的益生菌，本研究采用點(diǎn)種法和牛津杯法，以嗜水氣單胞菌為指示菌，從草魚養(yǎng)殖水體和底泥中篩選嗜水氣單胞菌拮抗菌，通過初篩和復(fù)篩總共得到8株對嗜水氣單胞菌有抑制作用的菌株。用牛津杯法測試菌株抑菌能力時(shí)發(fā)現(xiàn)，抑菌能力最強(qiáng)的菌株WM-1抑菌圈直徑可達(dá)到16.2±0.76 mm，抑菌能力最弱的菌株WM-4抑菌圈直徑也能達(dá)到9.1±0.58 mm。菌株WM-1表現(xiàn)出較好的抑菌活性，通過對菌株WM-

6、1的形態(tài)學(xué)觀察、生理生化試驗(yàn)以及16S rDNA序列分析，最終鑒定菌株WM-1為甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌（Bacillus methylotrophicus）。為了進(jìn)一步了解菌株WM-1的生理特性和拮抗特性，本研究以嗜水氣單胞菌為指示菌，以發(fā)酵上清液的抑菌活性為指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)和正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)相結(jié)合的方法，優(yōu)化了甲基營養(yǎng)型芽孢桿菌WM-1的培養(yǎng)基成分及培養(yǎng)條件，獲得了菌株WM-1產(chǎn)抑菌物質(zhì)的最佳培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件。試驗(yàn)得到最適發(fā)酵培養(yǎng)基成