草魚養(yǎng)殖水體的細菌群落結(jié)構(gòu)特征及維氏氣單胞菌的拮抗菌篩選研究.pdf

1、草魚是我國淡水魚類養(yǎng)殖中最大宗魚類品種，近年來，隨著追求高產(chǎn)的草魚養(yǎng)殖池塘投放密度越來越高，導(dǎo)致水質(zhì)環(huán)境惡化和病害加劇。研究池塘養(yǎng)殖水體的微生物組組成結(jié)構(gòu)，能促進淡水魚類健康養(yǎng)殖。本研究對湖南望城喬口草魚池塘暴發(fā)病與健康養(yǎng)殖水體微生物組進行了比較分析，對暴發(fā)病魚池病魚的疾病病原進行了分離鑒定及其拮抗菌篩選研究。
　　1.精養(yǎng)草魚池塘水體的微生物組結(jié)構(gòu)分析。采用Illumina Hiseq高通量測序技術(shù)和生物信息學(xué)技術(shù)，分析比較了精

2、養(yǎng)草魚魚塘患病和健康養(yǎng)殖水體的微生物組結(jié)構(gòu)。對微生物宏基因組測序數(shù)據(jù)分析，結(jié)果表明不同水體的樣品菌群共鑒定到38門、70綱、133目、269科、423屬，暴發(fā)病和健康養(yǎng)殖水體中細菌群落的α-多樣性存在差異，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析沒有達到顯著性水平，主坐標(biāo)分析與樣本熱圖聚類分析表明細菌群落結(jié)構(gòu)明顯不同。CCA分析表明，COD對水體菌群的分布有著顯著影響。
　　2.草魚病原新菌株的分離鑒定。從暴發(fā)病魚池的患病草魚體內(nèi)分離純化出一批維氏氣單胞菌疑

3、似菌株，選取一株優(yōu)勢菌株進行鑒定。結(jié)合16S rDNA序列分析和生理生化特性，鑒定為維氏氣單胞菌的新菌株，命名為AvX005（GenBank登錄號:KU641161）。該菌進行回復(fù)感染試驗?zāi)苁共蒴~強致病，并研究了其藥敏特性和生長特性。
　　3.拮抗菌的篩選及其活性物質(zhì)分析。針對病原維氏氣單胞菌AvX005新菌株，經(jīng)廣泛分離篩選出解淀粉芽胞桿菌，研究了該菌株對魚類病原菌具有廣譜性拮抗作用，發(fā)現(xiàn)對氣單胞菌屬的抑制效果最好。經(jīng)共凝集率測

4、定，解淀粉芽胞桿菌和維氏氣單胞菌共凝集率達到36.98％，拮抗菌動物保護力試驗測定，解淀粉芽胞桿菌對草魚的保護率達到80％。對解淀粉芽胞桿菌的抑菌活性物質(zhì)進行了理化性質(zhì)研究，表明該抑菌活性物具有熱穩(wěn)定性、耐酸、不耐強堿、對蛋白酶不敏感，能被有機溶劑萃取、酸沉淀，可推測該活性成分為非蛋白類物質(zhì)。
　　4.拮抗菌的抑菌活性物質(zhì)分子質(zhì)譜鑒定。發(fā)酵培養(yǎng)解淀粉芽胞桿菌，進行發(fā)酵液的活性物質(zhì)提取，經(jīng)UHPLC分離純化和質(zhì)譜儀鑒定，發(fā)現(xiàn)該活性物