辣椒素對(duì)乙醇誘導(dǎo)大鼠胃粘膜損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:通過觀察辣椒素(capsaicin,CAP)對(duì)乙醇誘導(dǎo)胃粘膜損傷的大鼠胃酸分泌,胃竇區(qū)組織內(nèi)辣椒素受體(vanilloid receptor subtype1,VR1)、降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)和P物質(zhì)(substance P,SP),及胃粘膜屏障的影響,探討CAP對(duì)乙醇誘導(dǎo)大鼠胃粘膜損傷的影響及其機(jī)制。
　　 方法:(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:48只SD雄性大鼠

2、,體重180g～240g之間,隨機(jī)分為四組:A組(正常對(duì)照組)、B組(乙醇模型組)、C組(CAP組)、D組(乙醇+CAP組),每組大鼠12只。(2)實(shí)驗(yàn)方法:所有SD大鼠飼養(yǎng)2周以適應(yīng)環(huán)境,然后按照以下方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn):A組:大鼠自由進(jìn)食進(jìn)水,生理鹽水10ml／kg／日分2次灌胃,連續(xù)14天。B組:大鼠自由進(jìn)食進(jìn)水,50％乙醇10ml／kg／日分2次灌胃,連續(xù)14天。C組:大鼠自由進(jìn)食進(jìn)水,CAP5mg／kg／日分2次灌胃,連續(xù)14天。D組

3、:大鼠自由進(jìn)食進(jìn)水,CAP5mg／kg／日+無水乙醇兩者體積之比為1:1混合后(即乙醇濃度為50％)分2次灌胃,連續(xù)14天。所有大鼠于實(shí)驗(yàn)結(jié)束前24h開始禁食(不禁水),然后進(jìn)行標(biāo)本采集。(3)檢測(cè)指標(biāo)及方法:①造模及給藥過程中觀察大鼠的一般情況。②胃酸的測(cè)定:所有大鼠經(jīng)麻醉后打開腹腔,將整個(gè)胃取出,剪開胃并用2ml生理鹽水清洗胃內(nèi)容物,收集清洗液,用酸堿滴定法測(cè)定胃酸。③胃竇組織內(nèi)VR1和CGRP、SP的表達(dá)情況:取各組大鼠胃竇組織(

4、約0.5cm×0.5cm)全層一塊,立刻置于4％的多聚甲醛中充分固定2h,石蠟包埋,連續(xù)5μm切片,用免疫組化方法分別進(jìn)行VR1、CGRP、SP測(cè)定。④胃壁凝膠層厚度測(cè)定:垂直切取胃竇部1.6mm厚度胃壁厚片,將切取的厚片置于倒置相差顯微鏡暗視野下用目鏡測(cè)微尺測(cè)定凝膠層厚度。⑤胃粘膜屏障改變:把清洗過胃內(nèi)容物之后的胃置于4％的多聚甲醛中充分固定后,肉眼觀察胃粘膜形態(tài),采用Guth標(biāo)準(zhǔn)改良評(píng)分評(píng)定胃粘膜損傷情況,并取胃粘膜組織送病理組織學(xué)

5、檢查,光鏡下對(duì)HE染色后的胃粘膜進(jìn)行觀察。
　　 結(jié)果:(1)動(dòng)物一般情況:實(shí)驗(yàn)過程中,A組大鼠精神狀態(tài)好,行動(dòng)靈活,食欲佳,皮毛光澤,大小便正常,體重增加；B組大鼠出現(xiàn)好斗,易激惹,互相撕咬等情況,毛色光澤,體重減輕,但無死亡。C組大鼠精神狀態(tài)好,行動(dòng)靈活,食欲佳,皮毛光澤,大小便正常,體重增加。D組大鼠精神狀態(tài),活動(dòng),皮毛光澤,大小便,體重增加。在灌胃過程中B組有4只大鼠、C組有1只大鼠、D組有2只大鼠曾出現(xiàn)嗆咳,但均無窒息

6、和死亡。(2)胃液總酸度的變化:各組大鼠的胃液總酸度分別為:A組48.27±2.14mmol／L,B組49.23±3.14mmol／L,C組34.12±2.09 mmol／L,D組35.19±3.08 mmol／L。其中A組胃液總酸度顯著大于C組和D組(P<0.05),B組胃液總酸度顯著大于C組和D組(P<0.05),而A組總酸度和B組之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),C組總酸度和D組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(3)胃竇組織內(nèi)V

7、R1的表達(dá)情況:大鼠胃竇區(qū)組織內(nèi)VR1表達(dá)水平分別為:A組0.62±0.49分,B組0.59±0.48分,C組2.61±0.34分,D組2.56±0.48分。其中C組及D組VR1表達(dá)水平均顯著大于A組及B組(p<0.05),A組VR1表達(dá)水平與B組表達(dá)水平?jīng)]有顯著性差異(P>0.05),C組VR1表達(dá)水平與D組表達(dá)水平?jīng)]有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(4)胃竇組織內(nèi)CGRP情況:大鼠胃竇組織內(nèi)CGRP表達(dá)水平分別為:A組1.06±0.4

8、3分,B組0.72±0.32分,C組2.19±0.57分,D組1.87±0.48分。其中B組CGRP表達(dá)水平顯著低于A組(p<0.05)、C組(p<0.05)、D組(p<0.05),A組CGRP表達(dá)水平顯著低于C組(p<0.05)、D組(p<0.05),D組CGRP表達(dá)水平顯著低于C組(p<0.05)。(5)胃竇組織內(nèi)SP情況:大鼠胃竇組織內(nèi)SP表達(dá)水平分別為:A組為0.51±0.49分,B組為0.49±0.53分,C組為0.76±0.

9、48分,D組為0.75±0.25分。其中C組SP表達(dá)水平較A組略有升高,但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；其余各組間SP表達(dá)水平均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(6)胃壁凝膠層厚度:大鼠胃壁凝膠層厚度分別為:A組72.22±6.21μm,B組41.76±5.28μm,C組71.34±4.87μm,D組60.28±5.27μm。其中B組凝膠層厚度顯著低于A組(p<0.05)、C組(p<0.05)、D組(p<0.05),D組凝膠層厚度顯著低于A組(p<0

10、.05)、C組(p<0.05),A組凝膠層厚度與C組凝膠層厚度差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(7)胃粘膜屏障:①肉眼下大鼠胃粘膜損傷情況:A組及C組胃粘膜光滑,B組胃粘膜可見充血水腫、點(diǎn)狀糜爛。D組胃粘膜可見充血水腫,未見糜爛。胃竇粘膜損傷評(píng)分(Guth標(biāo)準(zhǔn)改良評(píng)分)分別為:A組0分,B組27.42±3.61分,C組0分,D組9.21±2.32分。其中B組粘膜損傷評(píng)分顯著大于A組(p<0.05)、C組(p<0.05)、D組(p<0

11、.05),D組粘膜損傷評(píng)分顯著大于A組(p<0.05)、C組(p<0.05),A組粘膜損傷評(píng)分與C組粘膜損傷評(píng)分沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。②大鼠胃竇粘膜病理組織學(xué)改變:A組、C組大鼠胃竇粘膜上皮細(xì)胞形態(tài)正常,排列整齊,未見粘膜脫落、充血、水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及腺體結(jié)構(gòu)紊亂和壞死。B組大鼠胃竇粘膜鏡下見表層上皮損傷、脫落,粘膜充血水腫,中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),偶可見潰瘍病灶。D組大鼠胃竇粘膜上皮細(xì)胞輕度脫落、充血、水腫,未見腺體結(jié)構(gòu)紊亂和壞死

12、上皮細(xì)胞、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。大鼠胃竇粘膜病理組織損傷積分(Masuda標(biāo)準(zhǔn)方法)分別為:A組0.12±0.38分,B組3.91±1.10分,C組0.11±0.25分,D組1.21±0.28分。其中B組病理組織損傷積分顯著大于A組(p<0.05)、C組(p<0.05)、D組(p<0.05),D組病理組織損傷積分顯著大于A組(p<0.05)、C組(p<0.05),A組病理組織損傷積分與C組病理組織損傷積分沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。