大鼠脊髓損傷后二次繼發(fā)性損傷的發(fā)現(xiàn)及其治療.pdf

1、在大多數(shù)國家，脊髓損傷(spinalcordinjurySCI)的年發(fā)生率為每百萬20-40人，雖然預(yù)防措施已經(jīng)啟動(dòng)，但這一指數(shù)并未有減小的跡象(Tator，F(xiàn)ehlings，1991；Profyrisetal.，2004)。脊髓外傷的主要原因是交通事故(45.4％)，少部分是高處墜落(16.8％)和運(yùn)動(dòng)損傷(16.3％)引起(Fernandezetal.，2006)，在我國因礦難事故而致SCI數(shù)也是驚人的。SCI往往導(dǎo)致患者終生殘疾，

2、造成社會(huì)和家庭的巨大痛苦及沉重負(fù)擔(dān)。在脊髓損傷后有一由原發(fā)性損傷引發(fā)的繼發(fā)性損傷，其所造成的損傷范圍幾倍于原發(fā)性損傷。因此，如何減輕繼發(fā)性損傷是國際上多年來重點(diǎn)研究的課題。但至今除了在損傷8小時(shí)內(nèi)給予大劑量甲基強(qiáng)的松龍一個(gè)方法有一定效果外，還沒有其他比較公認(rèn)的方法。 要尋找人類脊髓損傷的合理治療方法，必須有一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化、高重復(fù)的動(dòng)物模型。目前最常用的是美國紐約大學(xué)的大鼠撞擊傷模型較好地模擬人類的SCI。但其高重復(fù)性還比較難達(dá)到。此

3、外，為研究SCI病理變化的機(jī)制及治療對(duì)策，還需要不同損傷范圍的動(dòng)物模型。為此，我們研制了一高重復(fù)、多用途的模型。首先從椎板去除術(shù)的手術(shù)方法上改進(jìn)，改以往用咬骨鉗反復(fù)咬除去除椎板，采用經(jīng)椎弓根剪斷方式去除椎板，保證了從脊髓最大橫徑處暴露脊髓；利用導(dǎo)管將撞擊頭可精確地預(yù)定在脊髓表面，在導(dǎo)管內(nèi)用重物撞擊撞擊頭，保證了撞擊的可重復(fù)性。也可將重物直接放在脊髓表面，按設(shè)定的速度擠壓脊髓。還設(shè)計(jì)了不同形狀的撞擊和擠壓頭。用窄扁擠壓頭，擠壓重量20克，

4、緩慢擠壓T8節(jié)脊髓，共10例，在脊髓中線附近可見與脊髓縱行方向垂直的平均0.59±0.11mm寬的矩形損傷區(qū)。用直徑與脊髓直徑相等的撞擊頭，25克的重物，從2cm高度自由落下，造成脊髓撞擊傷10例，見硬膜下彌漫性出血，脊髓出現(xiàn)明顯水腫，并造成一近似于倒三角形與脊髓縱行方向垂直的損傷區(qū)，損傷區(qū)內(nèi)充滿壞死組織，在脊髓中線附近損傷區(qū)的最大損傷平均寬度為1.00±0.04mm。 在使用了此模型造成大鼠脊髓較小范圍的擠壓傷后，我們通過觀察

5、損傷后0h-4w的病理變化，發(fā)現(xiàn)損傷區(qū)范圍進(jìn)行性擴(kuò)大的同時(shí)，在傷后48-72h之間的存在第二次繼發(fā)性損傷。由于目前國際只認(rèn)識(shí)到SCI繼發(fā)性損傷是由原發(fā)性損傷引發(fā)的，因此治療的對(duì)策主要集中于減輕原發(fā)性損傷對(duì)脊髓的致病作用，其有效窗口很窄。發(fā)現(xiàn)第二次繼發(fā)性損傷，為治療SCI后損傷提供了一個(gè)極好的機(jī)會(huì)。 針對(duì)48-72h時(shí)第二次繼發(fā)性損傷的發(fā)現(xiàn)，我們利用擠壓損傷模型，在損傷后24h通過尾靜脈注射給藥方式用藻酸雙酯鈉、疏血通分別進(jìn)行治療

6、。在72h時(shí)，與未治療組相比，藻酸雙酯鈉、疏血通治療組損傷區(qū)內(nèi)彌漫性出血消失；2w時(shí)，藻酸雙酯鈉損傷區(qū)面積與損傷區(qū)最大橫徑分別為1.09±0.34mm2、1.85±0.33mm，而疏血通治療組分別為0.96±0.20mm2、1.84±0.40mm，與未治療組相比較均有顯著性差異(p＜0.01)，而且未形成明顯空腔；免疫組織化學(xué)染色顯示，與未治療組相比經(jīng)藻酸雙酯鈉、疏血通治療后損傷區(qū)內(nèi)NF陽性纖維明顯增多。 在脊髓繼發(fā)性損傷中，出

7、血、缺血是其主要的病理變化，而且我們發(fā)現(xiàn)藻酸雙酯鈉、疏血通對(duì)脊髓二次繼發(fā)性損傷有明顯治療作用，而它們主要作用就是保護(hù)血管、糾正缺血。為此我們觀察了脊髓擠壓傷后0h-4w損傷區(qū)血管變化情況，采用單寧酸-氯化鐵灌注，結(jié)合HE、免疫組織化學(xué)方法復(fù)染方法，顯示在損傷后24h內(nèi)，損傷區(qū)內(nèi)血管與神經(jīng)細(xì)胞都廣泛丟失，損傷后72h-1w，在沒有星形膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)的損傷區(qū)觀察到新生血管逐漸增加，損傷2w后空腔逐漸形成，損傷區(qū)新生血管較前減少，但卻與星形膠質(zhì)

8、的突起相互關(guān)聯(lián)，而到4w時(shí)，空洞完全形成，新生血管與星形膠質(zhì)的突起相互支持圍繞空洞存在。 通過以上實(shí)驗(yàn)我們認(rèn)為：1.多用途脊髓致傷儀可以建立重復(fù)性很高的大鼠擠壓傷或撞擊傷模型；2.在擠壓傷模型中發(fā)現(xiàn)與證實(shí)了脊髓損傷后在48-72h之間存在二次的繼發(fā)性損傷；3.藻酸雙酯鈉和疏血通對(duì)脊髓的二次繼發(fā)性損傷有明顯的治療作用；4.單寧酸-氯化鐵灌注染色方法是一種觀察脊髓血管以及損傷后血管變化的有效方法，星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)損傷區(qū)內(nèi)新生血管存活具