大鼠脊髓損傷后損傷區(qū)域膠質(zhì)瘢痕形成的變化規(guī)律.pdf

1、目的:本研究通過制備大鼠脊髓右半橫斷損傷模型,觀察大鼠脊髓損傷后損傷區(qū)域的形態(tài)學(xué)變化及膠質(zhì)瘢痕的時(shí)間與空間分布,探討膠質(zhì)瘢痕的分布規(guī)律。
　　方法:(1)構(gòu)建大鼠脊髓右半橫斷損傷模型,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、假手術(shù)組,脊髓損傷1d、3d、1w、2w、3w和4w組,共8組。(2)分別在損傷前、損傷后定期進(jìn)行BBB功能評(píng)分,連續(xù)觀察大鼠SCI后運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況;在傷后1d、3d、1w、2w、3W、4w隨機(jī)處死各組大鼠6只,進(jìn)行HE染色、N

2、issl染色及免疫組化染色,在光鏡及透射電鏡下觀察大鼠SCI后的形態(tài)學(xué)變化,并在大鼠SCI4w后用BDA順行神經(jīng)纖維示蹤法和HRP逆行神經(jīng)纖維示蹤法觀察膠質(zhì)瘢痕的形成對(duì)軸突再生的影響;用Westernblot檢測(cè)大鼠SCI后各實(shí)驗(yàn)組GFAP、CSPGs蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:(1)大鼠脊髓右半橫斷損傷模型制備成功。(2)各脊髓損傷組大鼠3d內(nèi)BBB評(píng)分均低至0-1分;SCI1w后BBB評(píng)分逐漸增高,脊髓損傷后2-4w脊髓功能恢

3、復(fù)較快,在4周時(shí)達(dá)到平臺(tái)期。(3)HE染色染色結(jié)果顯示:傷后各實(shí)驗(yàn)組大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞大量增生,膠質(zhì)瘢痕及空洞形成。在SCI2w時(shí)開始形成囊腔,SCI4w時(shí)形成的囊腔較為穩(wěn)定,囊腔位于脊髓的中央部,呈不規(guī)則的長(zhǎng)橢圓形,長(zhǎng)軸與脊髓縱軸一致,提示大鼠脊髓損傷模型傷后4w進(jìn)入慢性期。(4)Nissl染色結(jié)果顯示:SCI后各組可見損傷區(qū)尼氏體減少甚至消失,胞質(zhì)內(nèi)小空泡或顆粒變形,在囊腔內(nèi)邊緣尼氏小體邊集。(5)免疫組化顯示:傷后各組脊髓損傷區(qū)

4、GFAP的表達(dá)較正常對(duì)照組及假手術(shù)組均增高。陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù):損傷2w較正常對(duì)照組、假手術(shù)組明顯增高(P<0.01),損傷2w較損傷3d有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);損傷2w時(shí),在損傷區(qū)近頭端和尾端可見有NF200陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞,從而可以明確地觀察到SCI后軸突的分布情況;CS-56免疫組化染色結(jié)果顯示在脊髓損傷后CSPGs陽(yáng)性細(xì)胞即有表達(dá),在SCI后2w時(shí)損傷中心區(qū)邊緣CSPGs陽(yáng)性細(xì)胞最多,達(dá)高峰。(6)BDA順行示蹤與HRP逆行示

5、蹤法觀察到示蹤劑僅行走于膠質(zhì)瘢痕外,未到達(dá)囊腔內(nèi)或行走于囊腔邊緣,未見有穿透膠質(zhì)瘢痕到達(dá)囊腔內(nèi)的。提示膠質(zhì)瘢痕對(duì)于軸突的再生有機(jī)械性的物理屏障作用。(7)Westernblot檢測(cè)發(fā)現(xiàn):損傷各組較正常對(duì)照組及假手術(shù)組GFAP蛋白的表達(dá)均上調(diào),損傷2w時(shí)GFAP蛋白表達(dá)水平最高,隨后逐漸降低;實(shí)驗(yàn)各組SCI后CSPGs蛋白的表達(dá)均增高,其中SCI2w組CSPGs蛋白的表達(dá)最高。(8)電鏡變化:SCI后2w時(shí)髓鞘結(jié)構(gòu)塌陷、軸索消失;4w可見