預(yù)知子提取物的制備及其抗抑郁藥效學(xué)研究.pdf

1、目的:采用系統(tǒng)溶劑法對藥材預(yù)知子(Fructus Akebiae)活性成分進(jìn)行提取分離,測定其主要成分常春藤皂苷元含量,明確預(yù)知子中抗抑郁活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。建立抑郁癥相關(guān)的行為絕望模型,進(jìn)行預(yù)知子提取物(Fructus Akebiae extract,FAE)急性和亞慢性抗抑郁活性的藥效學(xué)初篩；同時采用慢性應(yīng)激抑郁大鼠模型,對其抗抑郁作用進(jìn)行確證研究。建立皮質(zhì)酮(corticosterone,Cor)損傷的PC12細(xì)胞模型,觀察FAE對細(xì)

2、胞形態(tài)、細(xì)胞活力以及氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響,初步闡明預(yù)知子中抗抑郁癥活性成分的藥理作用機(jī)制,為開發(fā)新型抗抑郁中藥提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法:
　　 (1)預(yù)知子提取物通過以下系統(tǒng)溶劑法獲得:以預(yù)知子藥材為原料,先進(jìn)行脫脂處理,再依次進(jìn)行80％乙醇、乙酸乙酯和水飽和正丁醇提取后得預(yù)知子總皂苷,將所得總皂苷經(jīng)含酸乙醇降解及純化處理后得預(yù)知子提取物。并采用HPLC檢測方法,參照常春藤皂苷元標(biāo)準(zhǔn)品對FAE中的主要化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)解析

3、。
　　 (2)雄性昆明小鼠隨機(jī)分成5組,即溶劑對照[0.5％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液]組、FAE(25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg)給藥組、草酸-S-西酞普蘭(escitalopram,ESC)陽性對照(6.25 mg/kg)組,各組動物每日灌胃1次,每次0.2 ml/10g,連續(xù)給藥7天。建立小鼠的行為絕望模型,在首次給藥60min以及連續(xù)給藥7天24小時后分別進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實驗(the for

4、cedswimming test,FST)和(the tail suspension test,TST)不動時間記錄,以及自主活動計數(shù)。
　　 (3)雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機(jī)分成6組,即溶劑對照(0.5％CMC-Na溶液,無CUMS刺激)組、慢性應(yīng)激抑郁模型(0.5％CMC-Na溶液+CUMS)組、FAE低劑量給藥(6.25 mg/kg FAE+CUMS)組、FAE中劑量給藥(12.5 mg/kg FAE

5、+CUMS)組、FAE高劑量給藥(25 mg/kg FAE+CUMS)組、陽性對照(ESC 6.25 mg/kg)組。各組動物每日灌胃1次,每次1 ml/100g,連續(xù)給藥21天,造模在給藥第一天同時進(jìn)行。建立改良的慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激(chronic unpredicted mild stress,CUMS)加孤養(yǎng)大鼠模型,在造模給藥的第5、10、15、20天均分別記錄各組大鼠體重,計算體重變化值；采用敞箱實驗(theopen fi

6、eld test)檢測大鼠水平、垂直運動得分以及理毛次數(shù)得分；采用液體消耗實驗(fluid consumption test)檢測大鼠的糖水?dāng)z取體積、純水?dāng)z取體積、液體消耗總體積及糖水偏愛度；行為學(xué)檢測完畢后處死大鼠取血,采用放射免疫試劑盒來檢測大鼠血漿促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotrophic hormone,ACTH)和血清皮質(zhì)醇(cortisol,CORT)含量；取血同時取腦組織做石蠟切片,行HE染色法倒置顯微鏡下

7、觀察FAE對慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠海馬病理形態(tài)學(xué)的影響。
　　 (4)體外培養(yǎng)分化型PC12細(xì)胞,分別給予FAE高、中、低劑量(20μg/ml,10μg/ml和5μg/ml)及陽性對照藥物ESC(12.5μM)預(yù)保護(hù)4-6小時后,每孔再加入含有相應(yīng)濃度為200μM Cor的無血清DMEM(溶劑對照組不含任何藥物),培養(yǎng)48小時。光鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化:同時采用MTT比色法進(jìn)行細(xì)胞活力測定；選用抗氧化應(yīng)激試劑盒分別檢測細(xì)胞上清

8、液中SOD活性以及NO、GSH、MDA含量。
　　 結(jié)論:FAE主要成分常春藤皂苷元含量達(dá)71.55％,其產(chǎn)生藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)可確定為常春藤皂苷元；FAE可顯著改善行為絕望模型小鼠的抑郁樣行為；FAE可顯著改善慢性應(yīng)激大鼠的抑郁樣行為,使抑郁大鼠亢進(jìn)的HPA軸功能恢復(fù)正常,并改善其海馬DG區(qū)慢性應(yīng)激后的病理組織學(xué)變化；FAE對Cor誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷模型具有一定的保護(hù)作用,該作用可能與FAE清除細(xì)胞的氧自由基,減輕或阻斷細(xì)胞的