清膽滋腎方治療大鼠妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥(intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP)是以妊娠期發(fā)生皮膚瘙癢、黃疸為主要癥狀，伴膽酸、肝酶等生化異常，產(chǎn)后各種癥狀迅速消失為特征的妊娠期并發(fā)癥。該病主要對(duì)胎兒造成較大的危害，易引起早產(chǎn)、養(yǎng)水胎糞污染、胎兒宮內(nèi)窘迫、胎死宮內(nèi)等不良預(yù)后，現(xiàn)在已被列入高危妊娠。目前，ICP的臨床治療以藥物治療為主，西醫(yī)以熊去氧膽酸(ursodeoxycholic acid，UDCA)、消膽胺

2、，苯巴比妥，地塞米松等為主要治療藥物。這些藥物治療雖可取得緩解癥狀作用，但停藥后癥狀反復(fù)，若臨床長(zhǎng)期使用均有不良反應(yīng)，且對(duì)胎兒的毒性作用較大。中醫(yī)藥在臨床治療ICP方面有其獨(dú)到調(diào)節(jié)治療作用，且至今未見(jiàn)明顯不良反應(yīng)報(bào)道。清膽滋腎方是在臨床名老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)用方基礎(chǔ)上自擬而成，本課題試圖從血生化指標(biāo)、胎鼠成活率和肝組織病理學(xué)改變、肝細(xì)胞間黏附分子-1(intercellular adhension molecule-1，ICAM-1)和胎盤(pán)雌激素

3、受體(estrogen receptor,ER)的表達(dá)、胎盤(pán)細(xì)胞凋亡及凋亡調(diào)控基因Bax、Bcl-2的表達(dá)等方面來(lái)研究清膽滋腎湯對(duì)ICP的治療作用及其可能的作用機(jī)制。 一、清膽滋腎湯對(duì)肝內(nèi)膽汁淤積孕鼠血清生化指標(biāo)、胎鼠成活率及肝臟組織病理學(xué)改變的影響。 目的：探討ICP大鼠血清生化指標(biāo)、胎鼠成活率及肝臟組織病理學(xué)改變的影響，為清膽滋腎湯治療ICP提供生化和病理學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：采用苯甲酸雌二醇(Estradio

4、li Benzoas，EB)來(lái)誘導(dǎo)大鼠妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥的模型，設(shè)立正常組、模型組、清膽滋腎湯高劑量組、中劑量組、低劑量組和UDCA組六個(gè)組，造模的同時(shí)連續(xù)給藥，中藥治療組灌胃至臨產(chǎn)，西藥治療組連續(xù)灌胃5天。各組均于見(jiàn)陰道血性分泌物時(shí)終止妊娠，摘眼球法取血，斷頭處死后留取2塊新鮮肝臟和1塊胎盤(pán)組織，待做光鏡和電鏡標(biāo)本。剖宮取出胎鼠，觀察胎鼠成活率。運(yùn)用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定各組孕鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanineaminotransfer

5、ase，ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase，AST)、堿性磷酸酶 (alkaline phosphatase，ALP)、總膽紅素 (total bilirubin，TBIL)、總膽酸(total bileacid，TBA)值。 結(jié)果：模型組的各項(xiàng)生化指標(biāo)水平升高，與正常組相比有極顯著性差異(P<0.01)，經(jīng)治療后，高劑量組的AST、ALP 水平無(wú)顯著改善(P>0.05)，其ALT、TBI

6、L、TBA 水平則顯著降低(P<0.05或P<0.01)。其它各治療組相關(guān)生化指標(biāo)均有極顯著性下降(P<0.01)。在對(duì)AIT、AST、ALP、TBIL 的改善上，中劑量組療效最好，與正常組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，中劑量組 ALP、TBIL 的水平顯著低于UDCA組(P<0.05)，而中劑量組 ALT、AST的水平與 UDCA組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)；在對(duì) TBA 的改善上，UDCA 組效果最好，與正常組相比無(wú)顯著差別

7、(P>0.05)，中藥治療組中中劑量組效果最好，與 UDCA 組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，與正常組相比亦無(wú)明顯差異(P>0.05)。胎鼠成活率結(jié)果顯示：模型組的胎鼠成活率降低，與正常組相比有極顯著性差異(P<0.01)，除高劑量組外，各治療組均可非常顯著地提高ICP孕鼠的胎鼠成活率(P<0.01)，且與正常組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，尤以中劑量組效果最好，但與UDCA組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)。 肝臟組織病

8、理學(xué)研究顯示：光鏡下可見(jiàn)正常組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，無(wú)變性與壞死。模型組肝細(xì)胞腫脹，部分呈空泡樣變性，肝竇間隙狹窄明顯，少數(shù)肝毛細(xì)膽管擴(kuò)張，內(nèi)有膽拴形成。清膽滋腎湯高劑量組孕鼠肝臟光鏡下可見(jiàn)肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)較紊亂，肝竇間隙較狹窄，但未見(jiàn)明顯膽栓形成。中、低劑量組和UDCA組光鏡下觀察與正常組無(wú)顯著差異。電鏡下可見(jiàn)，正常組肝細(xì)胞線粒體嵴正常，毛細(xì)膽管不擴(kuò)張，無(wú)膽鹽沉積，超微結(jié)構(gòu)無(wú)明顯改變；模型組部分毛細(xì)膽管擴(kuò)張，微絨毛脫落，內(nèi)見(jiàn)電子密度高的無(wú)定形物(

9、可能為膽汁淤積)。 結(jié)論：清膽滋腎湯可能通過(guò)改善ICP大鼠的血清生化指標(biāo)，影響其肝臟病理學(xué)形態(tài)，從而提高胎鼠的成活率。提示該方藥具有良好的治病安胎之功效。 二、清膽滋腎湯對(duì)肝內(nèi)膽汁淤積孕鼠肝臟ICAM-1及胎盤(pán)ER表達(dá)的影響。 目的：通過(guò)檢測(cè)各組孕鼠肝臟ICAM-1及其胎盤(pán)ER的表達(dá)，來(lái)探討清膽滋腎湯的療效及其可能的作用機(jī)理。 方法：孕鼠肝組織和胎盤(pán)組織石蠟切片采用免疫組化SABC法分別檢測(cè)ICAM-Ⅰ和

10、ER的表達(dá)。 結(jié)果：(1)模型組ICAM-1的表達(dá)增強(qiáng)，與正常組相比較有極顯著性差異(P<0.01)；各中藥組ICAM-1的表達(dá)降低，與模型組相比均有極顯著性差異(P<0.01)，與正常組和 U=DCA組相比均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。(2)模型組ER的表達(dá)顯著高于正常組(P<0.05)，除高劑量組外，各中藥治療組ER的表達(dá)降低，與模型組相比有極顯著性差異(P<0.01)；除低劑量組外，各中藥治療組ER的表達(dá)與正常組相比均無(wú)

11、顯著性差異(P>0.05)，與UDCA組相比，亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 結(jié)論：清膽滋腎湯能夠明顯地抑制ICP大鼠肝臟ICAM-1及胎盤(pán)ER的上調(diào)，提示清膽滋腎湯治療ICP的可能作用點(diǎn)。 三、清膽滋腎湯對(duì)肝內(nèi)膽汁淤積孕鼠胎盤(pán)細(xì)胞凋亡及凋亡調(diào)控基因Bax、Bcl-2表達(dá)的影響。 目的：通過(guò)檢測(cè)各組孕鼠胎盤(pán)細(xì)胞的凋亡及凋亡調(diào)控基因Bax、Bcl-2的表達(dá)來(lái)探討清膽滋腎湯的療效及其可能的作用機(jī)理。 方法：

12、孕鼠胎盤(pán)組織石蠟切片采用原位末端脫氧核糖核苷轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling，TUNEL)法檢測(cè)胎盤(pán)細(xì)胞凋亡。胎盤(pán)凋亡調(diào)控基因Bax、Bcl-2的檢測(cè)采用免疫組化SABC法。 結(jié)果：凋亡結(jié)果顯示，各治療組可以不同程度地減少凋亡的細(xì)胞數(shù)，尤其以中劑量組治療效果更為明顯。 免疫組化結(jié)果顯示：模型組Bax的表達(dá)增強(qiáng)，Bcl-2的表達(dá)下降，與正常組相比有極顯著性