塵肺病患者外周血中CCL18和SDC2基因表達變化.pdf

1、背景：
　　 生產(chǎn)性粉塵是嚴重威脅勞動者健康且是我國職業(yè)工作場所最普遍的職業(yè)有害因素。截止到2010年,接觸生產(chǎn)性粉塵引發(fā)的塵肺病依然是我國發(fā)病率最高的職業(yè)病。2010年全國共報告塵肺病新病例23812例,報告塵肺病例數(shù)占職業(yè)病報告總例數(shù)的87.42％;其中94.21%的病例為煤工塵肺和矽肺,分別為12564例和9870例。在近三年我國每年新發(fā)職業(yè)病人群中,塵肺的新發(fā)病例幾乎維持在80～90%之間,且發(fā)病工齡有縮短的趨勢[1]。

2、我省塵肺病具有發(fā)生率高、患者群體龐大的特點,針對此現(xiàn)狀政府部門也已出臺《河南省職業(yè)病防治規(guī)劃(2010～2015年)》,塵肺病將是未來五年我省職業(yè)病防治的重中之重。由于對塵肺患者和暴露人群尚無有效的早期診斷和有效的健康監(jiān)護方法,一經(jīng)傳統(tǒng)的X線胸片確診,病人肺部纖維化進程已無藥物可逆轉(zhuǎn),不僅嚴重減低患者生命質(zhì)量,減少社會勞動力,而且增加了社會經(jīng)濟負擔。因此尋找能早期診斷和與塵肺病肺纖維化進程評價相關(guān)的生物標志物,及時發(fā)現(xiàn)高危人群并作出預警

3、,成為塵肺病早期診治的關(guān)鍵。
　　 近年來國內(nèi)外不少學者為尋找塵肺早期篩檢和肺纖維化進程評價的生物標志物作了不懈努力,并取得一定的成果。如在抗氧化劑、凋亡相關(guān)因子、細胞外基質(zhì)、細胞因子類和基因多態(tài)性等的研究方面取得一些進展。盡管在這些研究中有些指標具有一定的特異性和敏感性,但需要通過肺活檢、肺灌洗或支氣管肺泡灌洗等侵入手段獲得標本,使應(yīng)用受到很大限制。迄今為止,大部分與塵肺相關(guān)的生物標志物在特異性和敏感性方面存在不足,未有突破性

4、進展。因此,很有必要尋找一些新的不需要通過入侵手段就能得到的塵肺早期篩查,特別是可以用于評價和監(jiān)測肺間質(zhì)纖維化進程的生物標志物。
　　 多配體蛋白聚糖-2(Syndecan-2,SDC2)是一種跨膜蛋白聚糖,屬于硫酸乙酰肝素蛋白聚糖類的多配體蛋白聚糖(syndecan)家族成員,SDC2在肺組織中存在于肺巨噬細胞、內(nèi)皮細胞和成纖維細胞中。趨化因子配體18(CC-chemokineligand-18,CCL18)屬CC族趨化因子,

5、在肺組織中主要有肺泡巨噬細胞分泌。已有的研究證實,SDC2、CCL18等基因的高表達與肺間質(zhì)纖維化相關(guān),所以將其應(yīng)用于塵肺病肺纖維化研究,將為會塵肺病的診治提供新的分子靶點。
　　 本研究主要通過酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)和實時定量RT-PCR檢測SDC2和CCL18在患者血清中的蛋白濃度和血細胞中的基因表達變化,發(fā)現(xiàn)新的與塵肺病早期診斷和肺纖維化進程評價相關(guān)的生物標志物。同時探討塵肺病患者不同影像分期、肺功能、接觸粉塵性質(zhì)

6、(矽肺/煤工塵肺)等因素對外周血中這些基因表達的影響,建立可以用于塵肺病篩查和肺纖維化進程評價的新分子水平血液學檢測方法,為我省塵肺病的防治研究奠定重要實驗基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1.研究對象
　　 塵肺組:77例塵肺病患者的血樣標本取自2011年5月至10月河南省職業(yè)病防治研究院職業(yè)病科,均為男性,年齡為56.35±8.03歲。在知情同意的情況下,同時收集研究對象流行病調(diào)查表,并由專業(yè)人員進行血樣采集。

7、r>　　 健康對照組:取同期該院162例男性健康體檢者,無粉塵接觸職業(yè)史,均排除心、腦、肝、脾、腎、肺等臟器的器官性及纖維化疾病,年齡為53.70±7.17歲。
　　 2實驗方法
　　 2.1肺功能檢測
　　 采用日本生產(chǎn)的Autospiro-507肺功能儀對77例塵肺患者進行肺功能測定。測定指標為FVC(用力肺活量)、FEV1(第1秒用力肺活量,常以FEV1%表示)、一秒率(FEV1/FVC%)、最大通氣量(

8、MVV),以及各指標的預測值。
　　 2.2 ELISA法檢測血清中CCL18和SDC2的濃度水平
　　 血清CCL18、SDC2的濃度水平檢測采用雙抗體夾心ELISA法。R&D公司進口分裝CCL18試劑盒購自鄭州寶信生物技術(shù)有限公司,嚴格按說明書操作指南進行ELISA檢測,質(zhì)量控制和定標結(jié)果均在要求范圍內(nèi)。
　　 2.3 Real-Time PCR檢測CCL18和SDC2基因的表達
　　 采用實時定量R

9、T-PCR方法,以SYBR Green法和Taqman探針法分別檢測樣本中SDC2和CCL18基因的相對表達量。分析CCL18和SDC2基因在病例組和對照組、病例組不同分期之間、矽肺/煤工塵肺之間的表達變化。
　　 3統(tǒng)計分析
　　 采用SPSS12.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。采用Kolmogorov-Smimov(K-S)正態(tài)性檢驗評價病例組與對照組人群數(shù)據(jù)是否正態(tài),檢驗水準α=0.1。對于符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用t檢驗,

10、非正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用秩和檢驗,分別分析對照組與病例組受檢者外周血中CCL18、SDC2基因的表達差異是否有統(tǒng)計學意義,以及不同影像分期、肺功能、不同接塵性質(zhì)(矽肺/煤工塵肺)等因素對這些基因表達水平的影響(α=0.05)。
　　 4結(jié)果：
　　 (1)塵肺組血清中CCL18的濃度水平和基因轉(zhuǎn)錄水平均高于健康對照組,差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);塵肺組血清中SDC的濃度水平和基因轉(zhuǎn)錄水平均略高于健康對照組,差異均無統(tǒng)

11、計學意義(P>0.05):
　　 (2)塵肺組中,矽肺患者血清中CCL18的濃度水平和基因轉(zhuǎn)錄水平均高于煤工塵肺,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);矽肺患者血清中SDC2含量水平和基因轉(zhuǎn)錄水平均略高于煤工塵肺,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05):
　　 (3)塵肺組CCL18的濃度水平和基因轉(zhuǎn)錄水平均與患者肺功能損害程度有相關(guān)關(guān)系;而SDC2的血清含量水平和基因轉(zhuǎn)錄水平與患者肺功能損害程度無相關(guān)關(guān)系。
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