HGF基因治療和預(yù)防病理性瘢痕的實(shí)驗(yàn)研究及相關(guān)機(jī)制探討.pdf

1、病理性瘢痕是人類皮膚創(chuàng)傷后后組織修復(fù)過(guò)程中的必然產(chǎn)物，其機(jī)制尚不完全清楚，一般認(rèn)為皮膚的遷延愈合，修復(fù)細(xì)胞中成纖維細(xì)胞的大量增殖與凋亡抑制，細(xì)胞外基質(zhì)中膠原合成與降解失衡所引起。因此，加速皮膚創(chuàng)傷愈合，抑制成纖維細(xì)胞的過(guò)度增殖和促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)中大量膠原的降解是治療病理性瘢痕的基本原則。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Hepatocyte grOWth factor，HGF)是一種多功能的生理性細(xì)胞因子，能加速表皮和內(nèi)皮細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)和分裂增殖；并能抑制

2、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(Transforming growth factorβ1，TGFβ1)的活性，促進(jìn)多種基質(zhì)金屬蛋白酶產(chǎn)生。為此，開(kāi)展了HGF基因治療和預(yù)防病理性瘢痕的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及其相關(guān)機(jī)理的研究。目的是評(píng)價(jià)HGF基因治療和預(yù)防病理性瘢痕的療效，為HGF防治病理性瘢痕提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)；并探討其相關(guān)機(jī)理，為HGF促進(jìn)創(chuàng)傷愈合、治療病理性瘢痕提供理論基礎(chǔ)。 首先制作兔耳腹側(cè)增生性瘢痕模型，局部注射攜帶人HGF基因的質(zhì)粒pUDKH后，通過(guò)

3、大體觀察、肥大指數(shù)測(cè)量、組織病理學(xué)觀察、天狼猩紅染色、細(xì)胞凋亡情況及α-SMA的表達(dá)幾方面，評(píng)價(jià)HGF在治療病理性瘢痕方面的療效。大體觀察可見(jiàn)局部注射pUDKH 15d后，皮膚創(chuàng)口瘢痕組織變平、顏色變暗，而對(duì)照組創(chuàng)口依然保持增生性瘢痕組織特性，紅腫且高出周邊正常皮膚。pUDKH組的肥大指數(shù)最小(1.61±0.25)，而兩對(duì)照組分別為2.29±0.2和2.30±0.11。組織病理學(xué)觀察可見(jiàn)pUDKH組表皮分化較好，接近正常皮膚厚度，細(xì)胞排

4、列成典型復(fù)層鱗狀上皮并伴有角化形成；對(duì)照組表皮細(xì)胞分化相對(duì)差，細(xì)胞層相對(duì)較厚。而且對(duì)照組真皮層纖維組織明顯較pUDKH組厚，且纖維束粗大，排列紊亂。同時(shí)對(duì)組織進(jìn)行天狼猩紅染色，偏振光顯微鏡下觀察到對(duì)照組創(chuàng)口存在較豐富而粗大的Ⅰ型膠原。這就表明HGF有減少創(chuàng)口組織中膠原形成的作用。羥脯氨酸在膠原蛋白中含量恒定，可直接反映皮膚組織中膠原蛋白含量。通過(guò)對(duì)皮膚中羥脯氨酸含量的檢測(cè)，顯示pUDKH組單位皮膚組織內(nèi)的羥脯氨酸含量較對(duì)照組明顯減少(p

5、uDKH組為1.08±0.11μg/ml皮膚濕重，對(duì)照組分別為1.50±0.27和1.47±0.17μg/ml皮膚濕重)。運(yùn)用TUNEL檢測(cè)了pUDKH組和對(duì)照組兔耳瘢痕組織中細(xì)胞凋亡情況，結(jié)果顯示pUDKH組明顯比對(duì)照組細(xì)胞凋亡數(shù)目多。這就說(shuō)明HGF可能通過(guò)促進(jìn)肌成纖維細(xì)胞凋亡的途徑來(lái)達(dá)到治療病理性瘢痕的目的。同時(shí)免疫組化染色結(jié)果提示，在pUDKH組隨著瘢痕的成熟α-SMA的表達(dá)逐漸下降，說(shuō)明肌成纖維細(xì)胞在不斷退縮，符合生理性反應(yīng)。但