Typl-HGF基因治療TNBS誘發(fā)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：評(píng)價(jià)攜帶肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因的減毒沙門(mén)氏菌(Typl-HGF)對(duì)TNBS誘發(fā)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型的治療效果。 方法：1.分別用l×109cfu的減毒沙門(mén)氏菌(Ty)，攜帶綠色熒光蛋白的減毒沙門(mén)氏菌(Typl-GFP)、攜帶肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因的減毒沙門(mén)氏菌(Typl-HGF)、10％NaHCO3 0.3ml第0、14、28天灌胃免疫小鼠，末次免疫后7d，分別采集各組動(dòng)物全血并抗凝，用流式檢測(cè)抗凝血中CD4+、CD8+、IgM、

2、IgG1、IgA，用EIASA檢測(cè)血清IgM、IgG1、IgA免疫球蛋白，MTT法檢測(cè)脾臟B、T淋巴細(xì)胞的增殖能力。 2.40只wistar大鼠經(jīng)TNBS灌腸誘發(fā)潰瘍性結(jié)腸炎模型，并隨機(jī)分為4組：Ty治療組、Typl-GFP觀察組、Typl-HGF治療組、模型對(duì)照組，每組10只；另設(shè)生理鹽水灌腸的正常對(duì)照組10只。造模后第3d各組灌胃進(jìn)行治療，依次給予1×109cfu的Ty、Typl-HGF、Typl-GFP菌液，每只0.5ml

3、，隔日一次，模型和正常對(duì)照組給予同體積的100g/L NaHCO3。3次和6次灌胃后1 W，分別觀察各組大鼠的一般情況、結(jié)腸大體觀及評(píng)分、結(jié)腸組織學(xué)變化及評(píng)分和目的基因表達(dá)，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組外周血CD4+、CD8+、IgM、IgGl、IgA。 結(jié)果：1.小鼠末次免疫后7d，Typl-HGF實(shí)驗(yàn)組CD4+、CD8、、CD4+/CD8+比值降低(p<0.01、p<0.05、p<0.01)。IgM、IgA無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，IgG1顯著

4、升高p<0.01。 2.3、6次灌胃模型組與正常組相比CD4+T、細(xì)胞無(wú)明顯變化，但CD8+T細(xì)胞下降明顯(P<0.01)；3次治療組CD4+T低于模型組P<0.05，3、6次灌胃模型組CD4+/CD8+T比值較正常組升高(P<0.05)；6次灌胃治療組CD4+、CD8+均明顯低于模型組、對(duì)照組(P<0.01，P<0.01，P<0.05，P<0.05)，CD4+/CD8+T比值較模型、對(duì)照組下降(P<0.05)。3、6次灌胃模型

5、組與正常組相比IgM、IgG1、IgA明顯增加；3、6次對(duì)照組與同期模型相比IgM明顯增加(P<0.01)，而6次治療組與模型組相比IgM、IgG1明顯降低(P<0.05)。 3.Typl-HGF治療組3次灌胃后體重略有增加，較模型對(duì)照組平均增加5.3l±1.13g，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)腸炎常見(jiàn)癥狀如粘液膿血便、糞便稀等較其它組稍有改善：6次Trypl-HGF治療后動(dòng)物潰瘍性結(jié)腸炎常見(jiàn)癥狀均明顯好轉(zhuǎn)，精神萎靡減

6、輕，無(wú)便中帶血，體重較模型對(duì)照組平均增加9.75±2.07g，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，Ty治療組與模型對(duì)照組大鼠癥狀均無(wú)明顯緩解。3次和6次Typl-HGF治療組結(jié)腸大體標(biāo)本積分分別為2.20±0.90和1.70±1.10，明顯低于同期Ty治療組(5.10±1.70，4.00±1.50)和模型對(duì)照組(5.30±1.30，4.30±1.20)(P<0.01)，且3次和6次Typl-HGF灌胃治療相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)

7、。光學(xué)顯微鏡觀察可見(jiàn)，3次灌胃后Typl-HGF治療組與其它組相比，腸組織炎癥減輕，潰瘍面縮小，并可見(jiàn)粘膜及組織增生現(xiàn)象，組織學(xué)評(píng)分為3.87±0.76，但與Ty治療組和模型對(duì)照組無(wú)明顯差別(P>0.05)；6次Typl-HGF治療后腸組織病理檢查較3次治療更好，潰瘍邊可見(jiàn)新生肉芽組織增生，有的甚至潰瘍及黏膜已修復(fù)，組織學(xué)評(píng)分為1.60±0.30，而同期模型組標(biāo)本積分為3.50±0.70，二者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，3次和

8、6次Ty治療組與模型對(duì)照組相比無(wú)明顯改變。Typl-GFP灌胃后在結(jié)腸組織可見(jiàn)GFP強(qiáng)表達(dá)。 結(jié)論：1.口服Typl-HGF能降低了小鼠的細(xì)胞免疫和體液免疫，對(duì)正常小鼠免疫有抑制作用。2.Typl-HGF能明顯減輕TNBS誘發(fā)潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠的癥狀及炎癥，對(duì)已形成的粘膜損傷及潰瘍有促修復(fù)作用。同時(shí)大鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎發(fā)病過(guò)程中，機(jī)體免疫功能處于亢進(jìn)狀態(tài)，Typl-HGF能夠抑制T增殖和B淋巴細(xì)胞抗體的產(chǎn)生，它可能代表了一種新的治