PDCD5蛋白在SU細(xì)胞和SU-DXM細(xì)胞中的表達(dá)及意義.pdf

1、研究背景:
　　淋巴瘤(Lymphoma)是一種淋巴細(xì)胞克隆性增生的淋巴造血系統(tǒng)的惡性腫瘤,主要發(fā)生于淋巴結(jié),但也可發(fā)生于結(jié)外器官,如肺、胃、腸、皮膚、生殖器官、骨、骨髓及腦等。淋巴瘤可分為霍奇金淋巴瘤及非霍奇金淋巴瘤兩類。近年來(lái),惡性淋巴瘤的發(fā)病率呈上升趨勢(shì),其中B細(xì)胞淋巴瘤占大多數(shù)。此外,大量研究發(fā)現(xiàn)淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后及生物學(xué)行為與細(xì)胞凋亡紊亂密切相關(guān)。細(xì)胞凋亡受凋亡相關(guān)基因控制,目前已經(jīng)知道與惡性淋巴瘤相關(guān)的凋亡基因有

2、Survivin、Caspase等。
　　TF-1細(xì)胞凋亡相關(guān)基因19(TF-1 cell apoptosis-related gene19,TFAR19)是由北京大學(xué)人類疾病基因中心從人白血病細(xì)胞株 TF-1細(xì)胞中克隆到的一種重要凋亡相關(guān)新基因,國(guó)際人類基因命名委員會(huì)將其命名為PDCD5(programmed cell death5)。PDCD5定位于染色體19q12-q13.1,全長(zhǎng)基因約6kb,由5個(gè)內(nèi)含子及6個(gè)外含子組成,

3、cDNA全長(zhǎng)為590bp。實(shí)驗(yàn)表明 PDCD5是一個(gè)表達(dá)廣泛、進(jìn)化保守的重要凋亡正調(diào)控基因,該蛋白不僅在凋亡過程中表達(dá)增加,而且在凋亡早期出現(xiàn)明顯的核轉(zhuǎn)位現(xiàn)象,因而PDCD5可能作為一種新的早期凋亡的標(biāo)志。由于PDCD5可能通過減少Survivin蛋白及增加Caspase活性來(lái)參與細(xì)胞凋亡調(diào)控過程,因此其表達(dá)異常與腫瘤的形成及發(fā)展進(jìn)程常密切相關(guān)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,PDCD5在白血病、肝癌、胃癌、乳腺癌、子宮頸癌等多種腫瘤細(xì)胞中存在異常表達(dá)。但

4、在惡性淋巴瘤細(xì)胞株中PDCD5的表達(dá)如何尚不清楚。
　　目的:
　　研究人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系SU細(xì)胞上清、SU/DXM細(xì)胞上清及使用不同濃度的DXM、VP-16、L-Asp及ADM誘導(dǎo)后的SU細(xì)胞上清中PDCD5的表達(dá)情況。
　　研究方法:
　　第一章、人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系SU細(xì)胞的生物學(xué)特性
　　顯微鏡下觀察SU細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài);細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記和分析細(xì)胞周期

5、分布;
　　第二章、SU/DXM細(xì)胞的生物學(xué)特性
　　地塞米松體外誘導(dǎo)SU細(xì)胞,并于顯微鏡下觀察SU/DXM細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài);細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記和分析細(xì)胞周期分布;MTT法分析耐藥譜及IC50值。
　　第三章、PDCD5在SU細(xì)胞和SU/DXM細(xì)胞中的表達(dá)
　　提取SU細(xì)胞和SU/DXM細(xì)胞上清,采用PDCD5酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒檢測(cè)上述兩種細(xì)胞上清中PDCD5的表達(dá)

6、情況。
　　第四章、PDCD5在被不同濃度的多種化療藥物誘導(dǎo)后SU細(xì)胞上清中的表達(dá)
　　使用不同濃度的DXM、VP-16、L-Asp及ADM誘導(dǎo)處于對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的SU細(xì)胞,并提取被誘導(dǎo)后的SU細(xì)胞上清,用PDCD5酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒檢測(cè)上清中PDCD5的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　第一章、人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系SU細(xì)胞的生物學(xué)特性
　　1.SU細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài):SU細(xì)胞培養(yǎng)液清亮,細(xì)胞呈懸浮生長(zhǎng),圓形,細(xì)胞體

7、積較大,透光性好。
　　2.SU細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài):根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制細(xì)胞生存曲線。細(xì)胞周期檢測(cè)比例如下:G0/G1期細(xì)胞為43.6％、S期細(xì)胞為48.5%、G2/M細(xì)胞為7.97%。不同細(xì)胞周期的SU細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不同。此外,SU細(xì)胞高表達(dá)B細(xì)胞的相關(guān)表面標(biāo)記,為B細(xì)胞系。
　　第二章、SU/DXM細(xì)胞的生物學(xué)特性
　　1.SU細(xì)胞經(jīng)DXM誘導(dǎo)成為多藥耐藥的SU/DXM細(xì)胞。SU/DXM細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)與SU細(xì)

8、胞沒有明顯差異。SU/DXM細(xì)胞仍為圓形,懸浮生長(zhǎng),胞體大小無(wú)變化,但細(xì)胞核中可見少許空泡。
　　2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期比例如下:G0/G1期50.9%,S期35.3%,G2/M期13.8%。SU/DXM細(xì)胞仍高表達(dá)B細(xì)胞的相關(guān)表面標(biāo)記,為B細(xì)胞系。
　　3.應(yīng)用MTT法檢測(cè)SU/DXM細(xì)胞對(duì)DXM、Vp-16、ADM和L-ASP的耐藥指數(shù)分別為SU細(xì)胞的8.68倍、1.37倍、3.92倍和3.56倍。
　　第三章

9、、PDCD5在SU細(xì)胞和SU/DXM細(xì)胞中的表達(dá)
　　利用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)SU細(xì)胞和SU/DXM細(xì)胞上清中PDCD5蛋白水平。SU/DXM細(xì)胞上清組中PDCD5蛋白的表達(dá)量明顯低于SU細(xì)胞上清組,分別為(10.67±1.48)ng/ml和(19.74±2.99)ng/ml,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.504,P<0.05)。
　　第四章、PDCD5在被不同濃度的多種化療藥物誘導(dǎo)后SU細(xì)胞上清中的表達(dá)
　　分別應(yīng)用不同濃

10、度的DXM、Vp-16、ADM和L-ASP誘導(dǎo)SU細(xì)胞,取共培養(yǎng)上清檢測(cè)發(fā)現(xiàn),誘導(dǎo)后SU細(xì)胞上清中有PDCD5蛋白表達(dá),且DXM、Vp-16的濃度與PDCD5表達(dá)水平呈正相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論:
　　1.DXM長(zhǎng)期體外誘導(dǎo)SU細(xì)胞可使其發(fā)生MDR。
　　2.PDCD5蛋白在SU/DXM細(xì)胞上清中表達(dá)明顯低于SU細(xì)胞上清。
　　3.不同濃度化療藥物誘導(dǎo)后SU細(xì)胞上清中均存在PDCD5蛋白表達(dá),且DXM、Vp-16的濃