血管內(nèi)皮生長因子對人樹突狀細(xì)胞功能成熟的影響.pdf

1、中山大學(xué)1767481碩士學(xué)位論文血管內(nèi)皮生長因子對人樹突狀細(xì)胞功能成熟的影響TheeffectofVEGFonmaturationofDCinvitro號業(yè)名稱腫瘤學(xué)學(xué)位申請人程霞指導(dǎo)教師張曉實(shí)副主任醫(yī)師答辯委員會(huì)委員主席：委員：中大學(xué)腫瘤防治中心二零零五年五月廣州糾L虱名淄諏丑∥照擴(kuò)伊簪中山大學(xué)碩士學(xué)位論文明顯相關(guān)的，患者的分期越晚、腫瘤分化越差、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越多、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移越多則VEGF的量越高，手術(shù)切除腫瘤組織后則VEGF的量明顯降

2、低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析認(rèn)為VEGF可以作為預(yù)測患者預(yù)后的指標(biāo)之一。TsunehiroOyama[271及AkihiroTakahashit293等小組研究VEGF與DC之間的關(guān)系，出體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明VEGF在活體內(nèi)通過抑制造血于細(xì)胞向DC的分化影響DC的分化及成熟，外源性給予VEGF則影響體內(nèi)DC的成熟，表明大多數(shù)的腫瘤組織產(chǎn)生VEGF，腫瘤組織中DC的密度與VEGF的表達(dá)量呈明顯的副相關(guān)。機(jī)體的抗腫瘤免疫主要是細(xì)胞免疫，T細(xì)胞在抗腫瘤免疫中起著重

3、要的作用。腫瘤來源于自身組織，腫瘤惡性轉(zhuǎn)化過程可產(chǎn)生腫瘤抗原，能為機(jī)體特異性免疫系統(tǒng)所識別，并刺激機(jī)體的免疫反應(yīng)。但是由于腫瘤患者體內(nèi)的DC功能缺陷及數(shù)目減少，腫瘤抗原不能有效的遞呈給T細(xì)胞，因此目前都是通過體外誘導(dǎo)培養(yǎng)DC并用腫瘤抗原負(fù)載制備疫苗，用于治療術(shù)后殘余病灶或微轉(zhuǎn)移的患者。然而，大多數(shù)的腫瘤組織產(chǎn)生VEGF，VEGF能抑制DC的功能，那么由含vEoF的腫瘤抗原負(fù)載DC是否影響DC的功能成熟就有待迸一步的闡明。本實(shí)驗(yàn)比較了幾種

4、常用的體外誘導(dǎo)DC成熟的方法，選用其中最能誘導(dǎo)DC功能成熟的方法，通過與VEGF共培養(yǎng)，觀察VEGF對DC功能成熟的影響。2實(shí)驗(yàn)方法21幾種誘導(dǎo)DC成熟方法的比較取正常人外周血，經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離得到外周血單個(gè)核細(xì)胞，于溫箱中溫育1小時(shí)，以貼壁的單個(gè)核細(xì)胞作為DC前體細(xì)胞，加入GMCSF、IL4誘導(dǎo)出未成熟DC，培養(yǎng)至第六天，分別加入TNFaKLH、TNFctIFNYKLH、OK一432、cocktails(TNF—qIL一1BIL一

5、6PGE2)誘導(dǎo)DC成熟，第七天，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)；收集成熟細(xì)胞用流式細(xì)胞儀方法分析細(xì)胞表型，主要是CD83、HLA—DR；收集成熟細(xì)胞培養(yǎng)上清用ELISA法檢測IL12表達(dá)；與T細(xì)胞以1：5、l：10、1：20、l：40的比例混合行混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，以檢測T淋巴細(xì)胞的增殖狀況。從中篩選出TNF—aIFNYKLH是四種方法中最能誘導(dǎo)DC功能成熟的方法。22VEGF對DC成熟的影響取正常人外周血分離PBMNC，在體外誘導(dǎo)出未成熟D