黃芪多糖對(duì)樹突狀細(xì)胞表型及功能成熟的影響.pdf

1、背景和目的:樹突狀細(xì)胞(DC)因其成熟時(shí)伸出許多樹突樣或偽足樣突起而得名，它是目前發(fā)現(xiàn)的功能最強(qiáng)大的專職抗原提呈細(xì)胞(APC)，參與抗原的攝取、加工及提呈，是機(jī)體免疫反應(yīng)的始動(dòng)者，在誘導(dǎo)初次免疫應(yīng)答過(guò)程中具有獨(dú)特的地位，由于它在機(jī)體的抗感染免疫及抗腫瘤免疫應(yīng)答中的作用極其重要而備受重視，成為近年來(lái)免疫學(xué)研究的熱點(diǎn)。 黃芪是一種傳統(tǒng)的補(bǔ)益類中藥，味甘、性溫，含有多種生物活性物質(zhì)，其中多糖成分的免疫活性尤為突出，它能夠提高細(xì)胞免疫及

2、體液免疫，增強(qiáng)免疫功能低下模型小鼠的免疫功能，并對(duì)細(xì)胞因子有一定的調(diào)節(jié)作用。但是目前還沒(méi)有黃芪多糖(ASP)影響樹突狀細(xì)胞成熟的研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外試驗(yàn)研究黃芪多糖對(duì)樹突狀細(xì)胞的功能調(diào)節(jié)的機(jī)制，為進(jìn)一步闡明黃芪多糖的免疫學(xué)活性提供依據(jù)。 材料和方法: 1.小鼠骨髓來(lái)源樹突狀細(xì)胞的培養(yǎng)：小鼠骨髓細(xì)胞在含有GM-CSF和IL-4的RPMI-1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)，于第三天換液，第五天應(yīng)用免疫磁珠分離系統(tǒng)純化得到樹突狀細(xì)胞。

3、 2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC表面分子CD11c和MHCⅡ類分子的表達(dá)：應(yīng)用PE標(biāo)記的抗MHCⅡ類分子(I-A/I-E)單克隆抗體和FITC標(biāo)記的抗CD11c單克隆抗體對(duì)DC進(jìn)行免疫熒光標(biāo)記后用流式細(xì)胞儀分析熒光強(qiáng)度。 3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC的吞噬功能：DC收集后加入1mg/mlFITC-dextran分別于37℃和4℃溫育1h，緩沖液洗兩遍后用流式細(xì)胞儀分析熒光強(qiáng)度。 4.應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)DC培養(yǎng)液中白細(xì)胞介

4、素-12(IL-12)的含量：收集DC，離心，取上清液加樣于己包被了小鼠IL-12抗體的試劑盒平板孔內(nèi)，試驗(yàn)終止后用酶標(biāo)儀測(cè)450nm吸光度。5.掃描電鏡觀察DC表面的超微結(jié)構(gòu)：收集DC，按常規(guī)掃描電鏡制樣流程處理后觀察DC表面的超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用小鼠骨髓來(lái)源的DC，通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證明了黃芪多糖能夠提高DC表面分子CD11c和MHCⅡ類分子的表達(dá)，并且呈黃芪多糖濃度依賴性；空白組DC的吞噬功能很強(qiáng)，LPS陽(yáng)性對(duì)照組DC和

5、黃芪多糖實(shí)驗(yàn)組DC吞噬功能都明顯下降；黃芪多糖能夠促進(jìn)DCIL-12的表達(dá)；電鏡觀察DC的超微結(jié)構(gòu)，可見(jiàn)黃芪多糖實(shí)驗(yàn)組DC突起增多，形態(tài)上更加成熟。 結(jié)論: 1.黃芪多糖能夠上調(diào)樹突狀細(xì)胞表面MHCⅡ類分子和共刺激分子的表達(dá)。 2.黃芪多糖抑制樹突狀細(xì)胞對(duì)FITC-dextran的吞噬。 3.黃芪多糖能夠促進(jìn)樹突狀細(xì)胞分泌IL-12。 4.黃芪多糖能夠促進(jìn)樹突狀細(xì)胞形態(tài)學(xué)的成熟。 綜上所述