蝎素ITX對(duì)C57BL-6小鼠Lewis肺癌生長(zhǎng)及對(duì)荷瘤小鼠免疫調(diào)節(jié)的作用.pdf

1、目的：選擇C57BL/6小鼠Lewis肺癌為動(dòng)物模型，并以rIL-2為陽(yáng)性對(duì)照藥，觀(guān)察蝎素ITX對(duì)荷瘤小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用、及對(duì)C57BL/6小鼠Lewis肺癌生長(zhǎng)的影響。 方法：取清潔級(jí)C57BL/6小鼠40只，體質(zhì)量18～25g，4～6周齡，雌雄各半，按清潔級(jí)要求飼養(yǎng)。小鼠適應(yīng)環(huán)境7天后，隨機(jī)抽取8只，設(shè)為A.空白對(duì)照組，其余接種Lewis肺癌荷瘤種鼠的瘤細(xì)胞懸液。第2天起，將動(dòng)物稱(chēng)體重、分組，隨機(jī)分為4組，每組8只，分別

2、為：B.模型對(duì)照組、C.陽(yáng)性對(duì)照rIL-2-ip組、D.ITX-ip組、E.ITX-iv組，并開(kāi)始按設(shè)定的劑量和給藥方法用藥。用藥16天后，摘眼球取血，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血中免疫細(xì)胞(單核、NK、B和T細(xì)胞)的功能狀態(tài)；用酶聯(lián)免疫方法檢測(cè)外周血TGF-β1的血清含量；用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)腫瘤組織中癌細(xì)胞表面MHC-1分子、共刺激分子CD80和Fas配體(FasL)的表達(dá)水平。 結(jié)果：接種腫瘤后第8天，小鼠腋下可觸及腫瘤節(jié)結(jié)

3、，模型復(fù)制成功。用藥16天后，取材并檢測(cè)結(jié)果。 1.瘤體質(zhì)量(g)：B.模型對(duì)照組(0.234±0.08)，C.陽(yáng)性對(duì)照rIL-2-ip組(0.31±0.10)、D.ITX-ip組(0.65±0.20)、E.ITX-iv組(0.29±0.38)，各用藥組瘤體質(zhì)量均比模型組增加，其中組間兩兩比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2活化的單核細(xì)胞總量：A.空白組(3.3±1.7)、B.模型對(duì)照組(7.9±2.0)、C.陽(yáng)性對(duì)照rIL-2-i

4、p組(8.7±3.9)、D.ITX-ip組(9.2±4.2)、E.ITX-iv組(7.3±2.6)，后四組與空白組相比，活化的單核細(xì)胞總量高于空白組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；后四組間的活化單核細(xì)胞總量無(wú)明顯差異，ITX-ip組活化單核細(xì)胞的總量高于模型組和ITX-iv組，rIL-2-ip組接近于ITX-ip組。 3活化的NK細(xì)胞總量：A.空白對(duì)照組(0.3±0.2)、B.模型對(duì)照組(0.24±0.1)、C.陽(yáng)性對(duì)照rIL-

5、2-ip組(0.6±0.3)、D.ITX-ip組(0.3±0.2)、E.ITX-iv組(0.5±0.3)，后四組與空白組相比，僅模型組低于空白組，其它三組均接近或高于空白組，但僅空白組與rIL-2-ip組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，后四組間相比，rIL-2-ip組明顯高于模型組和ITX-ip組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，ITX-ip組高于模型組，ITX-iv組高于空白組、模型組和ITX-ip組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，ITX-iv組

6、與rIL-2-ip組相比，ITX-iv組活化的NK細(xì)胞總量接近于rIL-2-ip組。 4 活化的B細(xì)胞總量：A.空白對(duì)照組(6.7±1.3)、B.模型對(duì)照組(3.3±0.9)、C.陽(yáng)性對(duì)照rIL-2-ip組(5.3±1.5)、D.ITX-ip組(3.8±2.4)、E.ITX-iv組(4.6±1.6)，后四組與空白組相比，活化B細(xì)胞總量明顯低于空白組(P<0.05)，后四組間相比：rIL-2-ip組的活化B細(xì)胞總量明顯高于模型組和

7、ITX-ip組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，ITX-ip組高于模型組，ITX-iv組的活化B細(xì)胞總量高于模型組和ITX-ip組，接近于rIL-2-ip組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 5 活化的CD4+T細(xì)胞總量：A.空白對(duì)照組(1.5±0.6)、B.模型對(duì)照組(1.0±0.8)、C.陽(yáng)性對(duì)照rIL-2-ip組(1.3±1.0)、D.ITX-ip組(0.8±0.4)、E.ITX-iv組(1.2±1.2)，模型組、ITX-ip組、ITX-

8、iv組明顯低于空白組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，rIL-2-ip組低于空白組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，模型組、ITX-ip組、rIL-2-ip組和ITX-iv組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；表達(dá)共刺激分子受體CD28的CD4+T細(xì)胞的總量：A.空白對(duì)照組(9.1±1.9)、B.模型對(duì)照組(6.6±2.2)、C.陽(yáng)性對(duì)照rIL-2-ip組(6.1±2.3)、D.ITX-ip組(5.6±2.8)、E.ITX-iv組(3.2

9、±1.3)，模型組、ITX-ip組、rIL-2-ip組、ITX-iv組與空白組相比，明顯低于空白組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，模型組、rIL-2-ip組、ITX-ip組和ITX-iv組相比，明顯高于ITX-iv組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其余組間比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且各用藥組的CD4+T細(xì)胞的CD28表達(dá)總量均比模型組低。 6 活化的CD8+T細(xì)胞總量：A.空白對(duì)照組(8.0±1.1)、B.模型對(duì)照組(4.1±1.7)

10、、C.陽(yáng)性對(duì)照rIL-2-ip組(3.6±0.6)、D.ITX-ip組(3.5±1.0)、E.ITX-iv組(3.2±1.1)，空白組與后四組相比，差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，后四組間相比，差異不顯著，且各用藥組低于模型組；表達(dá)共刺激分子受體CD28的CD8+T細(xì)胞的總量：A.空白對(duì)照組(4.6±1.1)、B.模型對(duì)照組(1.9±1.0)、C.陽(yáng)性對(duì)照rIL-2-ip組(1.3±0.6)、D.ITX-ip組(1.7±0.9)

11、、E.ITX-iv組(0.7±0.2)，空白組與后四組相比，差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；后四組間相比，其中模型組與ITX-iv組、ITX-ip組與ITX-iv組相比，差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且各用藥組低于模型組。 7 TGFβ1血清含量(pg/ml)：A.空白對(duì)照組(11100±10069)、B.模型對(duì)照組(5804±5063)、C.陽(yáng)性對(duì)照rIL-2-ip組(15669±8267)、D.ITX-ip

12、組(13076±8001)、E.ITX-iv組(18957±7635)，模型組低于空白組，模型組、ITX-ip組、rIL-2-ip組和ITX-iv組四組依次升高，各組兩兩比較，僅模型組與rIL-2-ip組、模型組與ITX-iv組相比，差異顯著(P<0.05)，各用藥組均比空白組和模型組高。 8 腫瘤組織中的MHC-1分子的積分光密度：B.模型對(duì)照組(2397.27±1695.45)、C.陽(yáng)性對(duì)照rIL-2-ip組(2719.90

13、±1340.65)、D.ITX-ip組(2550.76±1679.35)、E.ITX-iv組(2485.14±1619.06)，各用藥組腫瘤組織中MHC-1分子的積分光密度高于模型組，模型組、ITX-iv組、ITX-ip組、rIL-2-ip組依次升高，組間兩兩比較，差異不顯著。 9 腫瘤組織中CD80分子的積分光密度：B.模型對(duì)照組(1854.11±1225.55)、C.陽(yáng)性對(duì)照rIL-2-ip組(2959.89±2364.64

14、)，D.ITX-ip組(2608.41±1640.86)、E.ITX-iv組(1606.34±1647.52)，各用藥組的腫瘤組織中CD80分子的積分光密度與模型組相比，除ITX-iv組外，均高于模型組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，ITX-ip組接近于rIL-2-ip組。 10 腫瘤組織中FasL的積分光密度：B.模型對(duì)照組(1913.27±1150.64)、C.陽(yáng)性對(duì)照rIL-2-ip組(1147.18±855.19)，D.

15、ITX-ip組(3122.43±1999.04)、E.ITX-iv組(1581.65±821.51)，ITX-ip組表達(dá)的FasL明顯高于模型組(P<0.05)，而rIL-2-ip組表達(dá)的FasL明顯低于模型組(P<0.05)；ITX-ip組表達(dá)的FasL明顯高于ITX-iv組(P<0.05)。 結(jié)論：由本實(shí)驗(yàn)推測(cè)：蝎素ITX和rIL-2可能具有相近的免疫調(diào)節(jié)作用，是一種非特異性的免疫調(diào)節(jié)劑，能促進(jìn)多種免疫細(xì)胞的的活化。與陽(yáng)性對(duì)

16、照藥物rIL-2相比，雖然兩者都使腫瘤細(xì)胞表面MHC-I和CD80共刺激分子的表達(dá)增加，腫瘤抗原的免疫原性增強(qiáng)，但由于Lewis肺癌的抗原調(diào)變性和腫瘤細(xì)胞表面FasL的表達(dá)上調(diào)，而引起T細(xì)胞的凋亡，并因此導(dǎo)致T細(xì)胞庫(kù)的耗竭，同時(shí)由于TGFβ1的分泌增加，使荷瘤小鼠的免疫狀態(tài)處于Th2狀態(tài)，抑制抗腫瘤的免疫應(yīng)答，及TGFβ1和單核細(xì)胞對(duì)腫瘤局部炎癥的加重，影響腫瘤生長(zhǎng)的微環(huán)境，而導(dǎo)致了腫瘤的生長(zhǎng)，兩者無(wú)明顯差異，為低分化、高惡性腫瘤的非特