蛋白磷酸酶2A在梗阻性腎病腎間質(zhì)纖維化中的作用.pdf

1、目的：
　　建立大鼠單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)及人近端腎小管上皮細(xì)胞（HK-2）纖維化模型，主要研究:1.檢測不同梗阻時(shí)間UUO大鼠腎PP2A表達(dá)情況明確PP2A和腎梗阻及腎間質(zhì)纖維化的關(guān)系;2.用PP2A阻斷劑岡田酸干預(yù)UUO大鼠和TGF-β1刺激的HK-2細(xì)胞，探討PP2A在腎間質(zhì)纖維化中的作用。
　　方法：
　　1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn):分兩批:第一批16只SD雄性大鼠，分空白組、UUO3天組、UUO7天組、UUO14天組;第

2、二批12只，分空白組、UUO3天組、岡田酸干預(yù)組。成模后分批宰殺大鼠取出梗阻側(cè)腎臟實(shí)驗(yàn);
　　2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn):分TGF-β1刺激HK-2細(xì)胞的模型組，空白組和岡田酸干預(yù)組3.免疫組織化、Western blot方法檢測PP2Ac，F(xiàn)N，Col-Ⅰ，E-cadherin和a-SMA的蛋白表達(dá)情況;
　　4.RT-PCR方法檢測PP2Ac，F(xiàn)N，Col-Ⅰ，E-cadherin和a-SMA的mRNA表達(dá)情況;
　　結(jié)果：

3、r>　　1.UUO大鼠梗阻時(shí)間的越長，PP2Ac蛋白表達(dá)升高，PP2Ac表達(dá)與細(xì)胞外基質(zhì)水平正相關(guān);
　　2.UUO組大鼠腎臟較空白組的PP2A c蛋白及mRNA表達(dá)升高;與UUO組相比岡田酸組PP2Ac表達(dá)下降。UUO組較空白組的FN、Col-Ⅰ蛋白及mRNA表達(dá)升高;與UUO組相比岡田酸組FN、Col-Ⅰ表達(dá)下降。UUO組較空白對照組的a-SMA蛋白及mRNA表達(dá)上調(diào)而E-cadherin表達(dá)下降，與UUO組相比岡田酸組a-S

4、MA表達(dá)下調(diào)而E-cadherin表達(dá)升高。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.TGF-β1刺激的HK-2細(xì)胞組較空白組PP2Ac蛋白表達(dá)上調(diào);與TGF-β1組相比岡田酸組PP2A c表達(dá)下調(diào)。TGF-β1組較空白組的FN、Col-Ⅰ蛋白表達(dá)上調(diào);與TGF-β1組相比岡田酸組FN、Col-Ⅰ表達(dá)下調(diào)。TGF-β1組較空白組的a-SMA蛋白表達(dá)上調(diào)而E-cadherin表達(dá)下降，與TGF-β1組相比岡田酸組a-SMA表達(dá)下調(diào)而E-cadh