葛根素和清開靈注射液在清醒Beagle犬的類過敏反應(yīng)檢測及其機(jī)制探討.pdf

1、隨著葛根素注射液和清開靈注射液在臨床上的廣泛應(yīng)用,其不良反應(yīng)的報道逐年增多,嚴(yán)重的有可能導(dǎo)致過敏性休克甚至死亡。二者引發(fā)的過敏反應(yīng)中有相當(dāng)一部分是首次給藥,且發(fā)生在給藥30min內(nèi),表現(xiàn)為明顯的類過敏反應(yīng)特征。
　　類過敏的臨床反應(yīng)癥狀與I型過敏反應(yīng)相似,主要表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹痛腹瀉、蕁麻疹、血管性水腫、過敏性哮喘等,然而其發(fā)生機(jī)制與過敏反應(yīng)不同,故而被稱為“類過敏反應(yīng)”。與I型過敏反應(yīng)比較,類過敏反應(yīng)為首次接觸致敏原即可引發(fā)過

2、敏樣癥狀,不需要免疫球蛋白介導(dǎo),而是直接刺激肥大細(xì)胞或嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒釋放過敏性介質(zhì)導(dǎo)致的。
　　建立類過敏反應(yīng)評價模型對清開靈注射液和葛根素注射液進(jìn)行類過敏反應(yīng)評價對降低臨床中用藥風(fēng)險具有重要的意義,本實驗室已建立的模型有麻醉Beagle犬類過敏反應(yīng)檢測模型等,本研究在其基礎(chǔ)上進(jìn)一步改善實驗方法,通過DSI清醒動物生理信號遙測系統(tǒng)建立清醒Beagle犬類過敏反應(yīng)檢測模型,對清開靈注射液和葛根素注射液引起的類過敏反應(yīng)進(jìn)行評價;分

3、離犬外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),評價清開靈注射液和葛根素注射液對細(xì)胞因子的影響,探討類過敏反應(yīng)與細(xì)胞因子的關(guān)系。
　　1.清醒Beagle犬類過敏反應(yīng)檢測模型的建立
　　目的:建立清醒Beagle犬類過敏反應(yīng)檢測模型,并用Tween80和Compound48/80評價該模型的可行性。方法:通過Beagle犬的植入手術(shù),將遙測系統(tǒng)的植入子植入犬的體內(nèi),手術(shù)恢

4、復(fù)后,經(jīng)靜脈推注分別給予犬Compound48/80和0．05%、0．1%、0．2%、0．5%的Tween80,采用DataquestA．R．T．4．3系統(tǒng)連續(xù)監(jiān)測給藥過程中及給藥后Beagle犬血壓和心率的變化并觀察犬的體征變化,研究血壓和心率作為該類過敏反應(yīng)檢測指標(biāo)的靈敏性。結(jié)果:Tween80和Compound48/80給藥后犬出現(xiàn)騷動、皮膚潮紅、鞏膜充血等類過敏反應(yīng)癥狀,且血壓出現(xiàn)不同程度的下降,心率加快。結(jié)論:建立的清醒Bea

5、gle犬類過敏反應(yīng)檢測模型具有良好的可行性,血壓、心率及犬的體征變化可作為該模型靈敏的檢測指標(biāo)。
　　2.對清開靈注射液及葛根素注射液的致類過敏反應(yīng)進(jìn)行評價
　　目的:利用清醒Beagle犬類過敏反應(yīng)檢測模型對清開靈注射液及葛根素注射液進(jìn)行評價,研究二者在清醒犬引發(fā)的類過敏反應(yīng)情況。方法:分別經(jīng)靜脈滴注以120 Ml.h-1的給藥速度給予犬不同濃度的清開靈注射液和葛根素注射液,采用Dataquest A．R．T．4．3系統(tǒng)連

6、續(xù)監(jiān)測給藥過程中及給藥后Beagle犬血壓和心率的變化并觀察犬的體征變化。結(jié)果:1．2 Ml．Kg-1,2．3 Ml-kg-1,11．5 Ml·kg-1清開靈注射液對犬血壓和心率均未產(chǎn)生明顯的影響,Beagle犬也未出現(xiàn)明顯的體征變化;0．24 Ml．Kg-1葛根素注射液對犬血壓和心率的影響不明顯,而0．47 Ml.kg-1葛根素注射液引起犬血壓明顯降低,平均動脈壓在藥后30 min時從藥前的(115．354±7．73)mmHg降低到(

7、91．74±10．18)mmHg(n=4,P<0．01),收縮壓從藥前的(147．33±14．65)mmHg降低到(112．884-6．51)mmHg(n=4,P<0．01),但未見明顯的體征變化,心率變化也不明顯。結(jié)論:120 Ml．H-1的給藥速度下清開靈注射液未引起清醒Beagle犬發(fā)生類過敏癥狀;葛根素注射液可使清醒犬的血壓降低,并與劑量相關(guān)。
　　3.利用犬PBMC評價清開靈注射液和葛根素注射液對細(xì)胞因子的影響及類過敏反

8、應(yīng)與細(xì)胞因子的關(guān)系
　　目的:初步探究清開靈注射液和葛根素注射液對Beagle犬細(xì)胞因子的影響,研究類過敏反應(yīng)與細(xì)胞因子之間的關(guān)系。方法:通過梯度密度離心法分離犬PBMC,分別與類過敏陽性藥Compound48/80及Tween80、清開靈注射液、葛根素注射液充分進(jìn)行反應(yīng)后利用相應(yīng)的犬細(xì)胞因子ELISA試劑盒測定PBMC釋放的細(xì)胞因子水平,主要測定的細(xì)胞因子為IFN-Γtnf-α、IL-6。結(jié)果:Compound48/80與Twe

9、en80使PBMC分泌的TNF-α水平下降,清開靈注射液組和葛根素注射液組的。INF-α水平也出現(xiàn)了明顯的下降,且具有統(tǒng)計學(xué)意義上的顯著性差異。PBMC與各組藥物反應(yīng)后分泌的IFN-γ水平有不同程度的下降,其中清開靈注射液引起的下降最為明顯。對IL-6的濃度進(jìn)行檢測,檢測結(jié)果顯示各組的吸光度值均小于標(biāo)準(zhǔn)對照組的最小值,因此所測結(jié)果無意義。結(jié)論:Compound48/80,Tween80以及清開靈注射液和葛根素注射液可引起犬細(xì)胞因子IFN