STAg聯(lián)合ESA滴鼻免疫小鼠對(duì)弓形蟲(chóng)垂直傳播的阻斷作用.pdf

1、本文研究目的：建立經(jīng)口感染弓形蟲(chóng)RH株速殖子垂直傳播小鼠模型，然后觀察可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen，STAg)滴鼻免疫小鼠對(duì)弓形蟲(chóng)垂直傳播的阻斷作用，探討STAg聯(lián)合排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens，ESA)滴鼻免疫小鼠對(duì)弓形蟲(chóng)垂直傳播的阻斷作用，為研制阻斷弓形蟲(chóng)垂直傳播疫苗提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究方法：分三部分： 第一部分：54只妊娠0天的BAL

2、B/c孕鼠隨機(jī)分為6組，于妊娠第8天，分別用0、1000、2000、4000、8000、16000個(gè)弓形蟲(chóng)速殖子灌胃感染，妊娠第18天處死，記錄活胎率，測(cè)定母鼠肝、胎盤(pán)和胎仔腦組織弓形蟲(chóng)抗原。 第二部分：130只5～6周齡BALB/c處女鼠隨機(jī)分為2個(gè)大組：PBS組和STAg組。PBS組以PBS 20μl/只滴鼻，STAg組以STAg 20μg/只滴鼻，免疫2次，間隔2周。末次免疫后處女鼠與雄鼠以2：1分批同籠交配，各組按免疫后

3、攻蟲(chóng)時(shí)間不同再分為1，2，3組，每組10只。妊娠第8天(分別對(duì)應(yīng)末次免疫后第11天、第17天、第23天)用8000個(gè)/只速殖子灌胃攻擊小鼠。妊娠第18天頸椎脫臼處死，記錄孕鼠感染率、活胎率，稱重脾臟、胸腺重量，采集母鼠腸液進(jìn)行IgA檢測(cè)，測(cè)定母鼠肝、胎盤(pán)和胚胎腦組織弓形蟲(chóng)抗原。 第三部分：BALB/c處女鼠40只隨機(jī)分為4組：PBS組、STAg組、ESA組和聯(lián)合抗原(STAg+ESA)組，每組10只。STAg組、ESA組和聯(lián)合抗

4、原(STAg+ESA)組分別用20μg/只STAg、20μg/只ESA和20μg/只聯(lián)合抗原(10μg STAg+10μg ESA)滴鼻，PBS組用PBS以20μl/只滴鼻，免疫2次，間隔2周。末次免疫后第13天處女鼠與雄鼠以2：1分批進(jìn)行同籠交配。妊娠第8天用8000個(gè)速殖子/只灌胃攻擊全部小鼠。妊娠第18天頸椎脫臼處死，記錄孕鼠感染率、活胎率，計(jì)數(shù)脾組織內(nèi)弓形蟲(chóng)速殖子，檢測(cè)母鼠小腸沖洗液slgA和血清IgG抗體水平，測(cè)定母鼠肝、胎盤(pán)

5、和胎仔腦組織弓形蟲(chóng)抗原。 研究結(jié)果： 不同劑量弓形蟲(chóng)經(jīng)口感染孕鼠后，孕鼠死亡率與胎盤(pán)和胚胎感染率均隨感染劑量的增加而升高，而活胎率下降。1000、2000組的胎盤(pán)、胚胎未發(fā)生感染，4000組的胚胎感染率5.13％，16000組的胚胎感染率20.00％，但孕鼠的健康狀況差、死亡率高，均不適宜建立弓形蟲(chóng)垂直傳播動(dòng)物模型。而8000組孕鼠既有較高的存活率，又可保證胎盤(pán)和胚胎較高的感染率。 用可溶性速殖子抗原(solub

6、le tachyzoite antigen，STAg)鼻內(nèi)免疫小鼠后，STAg第1、2、3組和PBS第1、2、3組孕鼠感染率和死亡率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。STAg第3組活胎率要明顯高于PBS第1組、2組和3組(P<0.05)。各組脾臟重量未見(jiàn)明顯變化；STAg第3組小鼠胸腺重量低于其它組(P<0.05)。STAg第3組孕鼠腸液sIgA高于除STAg第2組外的其它組(P<0.05)：STAg第1組、2組、3組孕鼠感染率隨免疫時(shí)間的增加而減少，而活

7、胎率增高，胎盤(pán)、胚胎感染率隨免疫時(shí)間的增加而減少。STAg第3組的胚胎感染率低于其它組。可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen，STAg)聯(lián)合排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens，ESA)鼻內(nèi)免疫小鼠后，STAg組、ESA組和聯(lián)合抗原組孕鼠感染率低于PBS組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。PBS組活胎率顯著低于ESA組和聯(lián)合抗原組(P<0.01)。STAg組、ESA組和聯(lián)合抗原組脾組織內(nèi)

8、蟲(chóng)荷(速殖子數(shù))顯著低于PBS組(P<0.01)。聯(lián)合抗原組和ESA組小腸沖洗液特異性sIgA均顯著高于PBS組(P<0.01)；PBS組、STAg組、ESA組、聯(lián)合抗原組血清IgG含量依次增高，但無(wú)顯著性差異。聯(lián)合抗原組滴鼻免疫小鼠其胚胎感染率均低于其他組。 研究結(jié)論：孕鼠灌胃感染8000個(gè)速殖子為建立弓形蟲(chóng)垂直傳播小鼠模型的適宜劑量。STAg20μg/只滴鼻免疫小鼠(免疫2次，間隔2周)，末次免疫后第23天攻蟲(chóng)可有效降低母鼠