超敏蛋白對煙草蝕紋病毒的防治研究.pdf

1、煙草蝕紋病毒(Tobacco Etch Virus，TEV)屬于馬鈴薯Y病毒屬（Potyvirus），最早發(fā)現(xiàn)于1930年的美國肯塔基州，隨后加拿大的部分煙區(qū)也發(fā)現(xiàn)了該病毒，逐漸發(fā)展成為一種世界性的病毒病。煙草蝕紋病毒主要通過蚜蟲的非持久性傳播，也可以通過種傳和機(jī)械傳播。煙草蝕紋病毒因病毒株系、寄主種類和長勢不同所表現(xiàn)的癥狀稍有不同。一般來說，植株開始發(fā)病初期是小斑點(diǎn)，隨著斑點(diǎn)數(shù)量的增多，出現(xiàn)線型的壞死組織和斑駁，并沿著葉脈發(fā)展，發(fā)病嚴(yán)

2、重時(shí)病斑布滿整個(gè)葉片，到發(fā)病后期病組織會干枯脫落，只留下焦枯的葉脈。近年來，煙草蝕紋病毒已成為繼黃瓜花葉病毒(CMV)、煙草普通花葉病毒(TMV)、馬鈴薯Y病毒(PVY)等危害煙葉生產(chǎn)品質(zhì)的第四大病毒病，在我國各大煙區(qū)普遍發(fā)生。煙草蝕紋病毒在陜西煙田的發(fā)病率一般在10％左右，近年來有逐年上升的趨勢。
　　前期本實(shí)驗(yàn)室從秦嶺植物根際土壤中篩選得到一株對多種病原菌具有顯著抗性的解淀粉芽孢桿菌Ba-168。結(jié)合前人對芽孢桿菌屬的研究，本

3、實(shí)驗(yàn)以解淀粉芽孢桿菌Ba-168為出發(fā)點(diǎn)，通過過濾離心、硫酸銨分級沉淀、陰離子交換層析等多種蛋白質(zhì)分離純化方法對解淀粉芽孢桿菌Ba-168的發(fā)酵液進(jìn)行提純分離，結(jié)合生物活性測定和過敏性壞死反應(yīng)發(fā)現(xiàn)能夠誘導(dǎo)煙草系統(tǒng)抗病性的超敏蛋白JDF-d的分子量在25-30 kDa之間。
　　為明確解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵液中超敏蛋白JDF-d對煙草蝕紋病毒的誘導(dǎo)抗性。本實(shí)驗(yàn)以三生煙和普通煙NC89為實(shí)驗(yàn)材料，測定100，300，500，800μg/m

4、L的超敏蛋白JDF-d對煙草蝕紋病毒的誘導(dǎo)抗性效果，試驗(yàn)結(jié)果表明不同濃度的超敏蛋白JDF-d粗蛋白提取液都能夠不同程度的提高煙草對煙草蝕紋病毒的抑制效果，誘抗效果隨著超敏蛋白濃度的增加而提高。采用300μg/mL的超敏蛋白JDF-d粗蛋白提取液進(jìn)行對煙草蝕紋病毒的鈍化試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:超敏蛋白JDF-d對煙草蝕紋病毒的體外鈍化效果不明顯，說明超敏蛋白JDF-d本身不具備對病毒粒子的抑制效果。隨后測定了300μg/mL超敏蛋白JDF-d

5、粗蛋白提取液對煙草的保護(hù)作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn):對煙草噴施300μg/mL超敏蛋白JDF-d粗蛋白提取液24小時(shí)和48小時(shí)后接種煙草蝕紋病毒的煙葉枯斑數(shù)較對照大幅度減少，枯斑抑制率分別達(dá)到67.08％和71.33％。在超敏蛋白JDF-d激發(fā)子的作用下，煙草葉片的SOD、PAL、POD三種防御酶主要表現(xiàn)為在一定時(shí)間內(nèi)酶活性升高，達(dá)到最高點(diǎn)后酶活性開始下降，酶活性均高于對照組。
　　解淀粉芽孢桿菌在自身生長過程中分泌的多種次生代謝產(chǎn)物，這些產(chǎn)

6、物能夠?qū)Χ喾N病原菌具有顯著的抑制作用，并對植物自身起到促生的作用，具有廣闊的發(fā)展和應(yīng)用前景。但由于此類物質(zhì)成分在5％綿羊血瓊脂平板上產(chǎn)生溶血現(xiàn)象，限制了解淀粉芽孢桿菌的進(jìn)一步開發(fā)，并對該菌株的安全性帶來隱患。用物理和化學(xué)誘變方法對解淀粉芽孢桿菌Ba-168進(jìn)行誘變，通過血瓊脂平板對突變菌株篩選出6株溶血性缺失的突變菌株。通過此次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)解淀粉芽孢桿菌對紫外誘變更為敏感，致死率更高，誘變結(jié)果更為理想。在試驗(yàn)中，紫外燈功率40W，樣品與紫外