糖尿病豬冠脈支架術后再狹窄發(fā)生中Cdc42和Rac1促氧化應激機制的研究.pdf

1、背景：糖尿病患者冠狀動脈藥物支架植入術后支架內再狹窄（ISR）發(fā)生率明顯高于非糖尿病患者,但發(fā)生機制不明。前期研究中我們建立了糖尿病冠狀動脈雷帕霉素支架術后ISR 的小型豬模型。飼養(yǎng)6 個月后處死模型。采集支架血管段并分離內膜。對典型ISR 和非ISR 血管段內膜組織進行二維-差異凝膠電泳（2D-DIGE）和質譜檢測的蛋白組學研究。發(fā)現(xiàn)ISR 組織中十余種蛋白水平顯著升高。這些蛋白與血管結構調節(jié)、自身代謝和氧化應激等通路有關。分析推測這

2、些通路上游與小G 蛋白調控有關。迄今，對小G 蛋白中Rac1、Cdc42 成員與氧化應激的關系了解還很有限。
　　 目的：探討Rac1、Cdc42 蛋白對平滑肌細胞氧化應激和炎癥反應調節(jié)作用，從而在體外實驗中闡明小G 蛋白對糖尿病冠狀動脈藥物支架置入術后ISR 發(fā)生的促進作用。
　　 方法和結果: 運用Western Blot 比較驗證糖尿病豬冠脈ISR 和非ISR 血管段平滑肌內膜組織的蛋白表達。發(fā)現(xiàn)小G 蛋白Cdc4

3、2 和Rac1 在糖尿病ISR 組織中明顯增高。培養(yǎng)原代大鼠主動脈平滑肌細胞（rASMCs），運用逆轉錄病毒體系建立穩(wěn)定表達Cdc42、Rac1 基因和其突變體的rSMCs 細胞株。以Carboxy-H2DCFDA 熒光檢測活細胞內活性氧含量。結果顯示，野生型和活化突變型Cdc42、Rac1、Cdc42V12 和Rac1V12 均誘發(fā)了血管平滑肌細胞的氧化應激狀態(tài)，而高糖培養(yǎng)或RAGE 配體刺激情況下更加劇這些小G 蛋白的誘導效應。同樣

4、，Realtime PCR 檢測發(fā)現(xiàn)野生型和活化突變型Cdc42 及Rac1 能促進了NADPH 氧化酶和ISR 相關炎癥因子和血管重構因子的表達，抑制了氧自由基清除酶的表達。但是，抑制突變型Cdc42N17 和Rac1N17 與野生型相比則對上述現(xiàn)象有抑制效應。
　　 結論: 小G 蛋白Cdc42 和Rac1 通過調節(jié)NADPH 氧化酶和抗氧化酶的表達來影響血管平滑肌細胞的氧化應激狀態(tài)，從而影響細胞炎癥因子的表達，促進血管炎癥