萬(wàn)傷合劑對(duì)小鼠脛骨缺損模型愈合影響的研究.pdf

1、目的：
　　 探討萬(wàn)傷合劑促進(jìn)小鼠脛骨缺損愈合的體外、體內(nèi)機(jī)制。
　　 方法：
　　 體外實(shí)驗(yàn)：萬(wàn)傷合劑濃縮液對(duì)IL-1β-luciferase（白介素1-β-熒光素酶）轉(zhuǎn)基因小鼠腹腔巨噬細(xì)胞IL-1β表達(dá)的影響；大鼠含藥血清對(duì)原代培養(yǎng)成骨細(xì)胞活性及上清的堿性磷酸酶表達(dá)的影響。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：建立脛骨缺損模型，以microCT(顯微CT)動(dòng)態(tài)研究脛骨缺損模型自然愈合過程；脛骨缺損模型小鼠分別給予萬(wàn)傷合劑、OPG（成骨生

2、長(zhǎng)肽）、萬(wàn)傷合劑加OGP、水，給藥后檢測(cè)血清堿性磷酸酶、離子鈣、無(wú)機(jī)磷等生化指標(biāo)；檢測(cè)造模第10天，第20天血清必須氨基酸含量；應(yīng)用免疫組化法與免疫印跡法檢測(cè)脛骨缺損修復(fù)處VEGF（內(nèi)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子）的表達(dá)。同時(shí)檢測(cè)了萬(wàn)傷合劑濃縮液內(nèi)堿性磷酸酶、鈣、磷及氨基酸濃度。
　　 結(jié)果：
　　 體外實(shí)驗(yàn)：萬(wàn)傷合劑組巨噬細(xì)胞的熒光值表達(dá)顯著高于LPS（脂多糖）組(p＜0.05)。大鼠含藥血清對(duì)培養(yǎng)的成骨細(xì)胞的細(xì)胞活性無(wú)提高作用，

3、而10％濃度單日連續(xù)給藥的大鼠含藥血清的堿性磷酸酶濃度顯著大于對(duì)照組(p＜0.05)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：在脛骨缺損的自然修復(fù)過程中，microCT檢查發(fā)現(xiàn)其骨礦物質(zhì)含量、骨密度、三維校準(zhǔn)骨小梁厚度均隨時(shí)間逐漸增高趨勢(shì)，三維校準(zhǔn)骨小梁分離度隨時(shí)間逐漸降低，骨小梁數(shù)目術(shù)后一直低于術(shù)前，且術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)之間無(wú)明顯差異，骨體積分?jǐn)?shù)逐漸增高，骨表面積與體積比值于術(shù)后先升高后降低。對(duì)脛骨缺損小鼠模型研究發(fā)現(xiàn)給藥組小鼠堿性磷酸酶表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組(分別為p

4、＜0.05;p＜0.01;p＜0.001)。而血清鈣離子測(cè)定：萬(wàn)傷合劑組、OGP組的血鈣水平較為穩(wěn)定顯著低于對(duì)照組，萬(wàn)傷合劑加OGP組術(shù)后血清鈣離子濃度顯著高于對(duì)照組，呈先升高后降低趨勢(shì)。血清無(wú)機(jī)磷測(cè)定發(fā)現(xiàn)用藥組血清無(wú)機(jī)磷顯著低于對(duì)照組。血清氨基酸測(cè)定：用藥組小鼠第20天血清精氨酸、亮氨酸、賴氨酸、脯氨酸含量均顯著高于對(duì)照組，而第10天，上述指標(biāo)無(wú)此變化。免疫組化及免疫印跡發(fā)現(xiàn)骨組織在用藥后VEGF表達(dá)顯著上調(diào)。
　　 結(jié)論：<

5、br>　　 體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：萬(wàn)傷合劑可以通過上調(diào)IL-1β的表達(dá)起到促成骨、促礦化的作用；未發(fā)現(xiàn)大鼠含藥血清對(duì)成骨細(xì)胞增殖有明顯影響，但單日連續(xù)給藥的大鼠血清可以有效促進(jìn)成骨細(xì)胞上清堿性磷酸酶表達(dá)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：microCT可以反映脛骨骨缺損模型的動(dòng)態(tài)修復(fù)過程。萬(wàn)傷合劑能抑制骨折修復(fù)過程的溶骨反應(yīng)，促進(jìn)成骨反應(yīng)，加快骨修復(fù)：可以提高促骨損傷修復(fù)所需的氨基酸含量，從而達(dá)到加快骨折愈合的效果。萬(wàn)傷合劑促進(jìn)骨修復(fù)的過程與促進(jìn)VEGF表達(dá)密切