中國(guó)黑木耳主要栽培菌株分子指紋分析.pdf

1、開(kāi)展我國(guó)黑木耳主要栽培菌株分子指紋分析研究，客觀評(píng)價(jià)我國(guó)黑木耳栽培菌株種質(zhì)資源的遺傳多樣性，掌握不同栽培菌株的鑒別方法，是充分保護(hù)和利用黑木耳種質(zhì)資源，開(kāi)展黑木耳良種選育，保護(hù)黑木耳品種知識(shí)產(chǎn)權(quán)，加強(qiáng)黑木耳菌種質(zhì)量管理的基礎(chǔ)。本研究從全國(guó)范圍內(nèi)收集了黑木耳34個(gè)主要栽培菌株，應(yīng)用同工酶技術(shù)和DNA標(biāo)記技術(shù)（ISSR、SCAR和SRAP）進(jìn)行了栽培菌株分子指紋分析。主要研究結(jié)果如下： 1.34個(gè)供試栽培菌株的酯酶同工酶分析結(jié)果，共

2、檢測(cè)到了113條酯酶同工酶譜帶，各個(gè)菌株具有2～6條不等的酶帶數(shù)，多數(shù)為2～4條，共有20個(gè)酶譜類(lèi)型，其中部分菌株之間的酶譜相同。聚類(lèi)分析結(jié)果，在71％的相似水平時(shí)，供試的34個(gè)菌株可以歸為3大類(lèi)。部分菌株之間相似系數(shù)甚至為1.0，顯示它們親緣關(guān)系很近，這些菌株可能為同物異名，需要從多個(gè)方面予以比較鑒別。 2．在對(duì)擴(kuò)增體系進(jìn)行正交優(yōu)化的基礎(chǔ)上，應(yīng)用篩選出的13個(gè)多態(tài)性引物對(duì)34個(gè)菌株基因組進(jìn)行PCR擴(kuò)增，共產(chǎn)生129條DNA帶，

3、96.9％呈現(xiàn)多態(tài)性，平均每個(gè)引物擴(kuò)增出9.9條帶。從129條DNA帶中選擇32個(gè)最佳的ISSR標(biāo)記譜帶，構(gòu)建了34個(gè)供試菌株的ISSR指紋圖譜模式圖，并將其計(jì)算機(jī)化。試驗(yàn)表明ISSR標(biāo)記技術(shù)可以快速、靈敏、準(zhǔn)確地應(yīng)用于黑木耳栽培菌株的鑒別。 3．對(duì)ISSR擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行分析獲得6個(gè)菌株的8條特異性條帶，將其中分別來(lái)自供試菌株173（引物P4）和186（引物P16）的2條特異性帶，通過(guò)回收克隆并測(cè)序，應(yīng)用軟件Primer Prem

4、ier5.0設(shè)計(jì)SCAR標(biāo)記引物對(duì)，成功地將它們轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記，用于對(duì)菌株173和186進(jìn)行特異性鑒定。這些SCAR標(biāo)記的建立，為黑木耳栽培菌株的鑒定提供了準(zhǔn)確可靠和迅捷方便的新途徑。 4．利用11對(duì)SRAP引物組合對(duì)34個(gè)菌株基因組進(jìn)行擴(kuò)增，共擴(kuò)增出154條DNA帶，其中具有多態(tài)性帶148條，占總帶數(shù)的96.1％，平均每組合引物擴(kuò)增出14.0條帶，顯示出比較高的多態(tài)比率。聚類(lèi)分析結(jié)果在一定程度上與ISSR標(biāo)記基本一致，表明

5、SRAP標(biāo)記也可以作為黑木耳菌株分子指紋分析的有效技術(shù)手段。 5．兩種DNA指紋分析結(jié)果表明，在一定相似水平上，34個(gè)菌株可聚為三大類(lèi)：第一大類(lèi)栽培菌株主要從東北地區(qū)收集，還包括河南和北京的少量菌株；第二大類(lèi)主要是長(zhǎng)江流域及其以南地區(qū)收集的菌株，但亦包含來(lái)自北方的部分菌株；第三大類(lèi)主要包括菌株9809、139和8129。該結(jié)果一方面表明我國(guó)黑木耳栽培菌株引種頻繁，另一方面也表明我國(guó)黑木耳栽培菌株可能主要來(lái)自于野生菌株馴化，東北地