HO-1對(duì)體外尿毒癥環(huán)境誘導(dǎo)HUVECs活化的保護(hù)作用.pdf

1、目的：研究誘導(dǎo)血紅素氧合酶-1（HO-1）高表達(dá)對(duì)尿毒癥環(huán)境介導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷和活化的調(diào)節(jié)作用。 方法：隨機(jī)選取我院血液透析中心常規(guī)血液透析治療的10 位患者，男女各5 例，年齡59.50±11.51 歲，維持性血液透析（MHD）治療70.80±56.42 月，取透析前無(wú)菌靜脈血,同期收集10 例年齡性別匹配的健康人血清，配成血清終濃度為10％的M199 培養(yǎng)液。體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株（HUVECs），以含10％MHD

2、患者血清的M199 培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，利用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法觀察10％MHD 患者血清對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)ICAM-1、MCP-1、IL-8 和VEGF 等細(xì)胞因子mRNA 的影響，并以MTT 比色分析法檢測(cè)尿毒癥環(huán)境對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖活力的損傷。 然后分別以HO-1 誘導(dǎo)劑氯化高鐵血紅素（hemin）及阻斷劑原卟啉鋅(ZnPP)預(yù)處理細(xì)胞6 小時(shí)后再加入含血清培養(yǎng)基，利用RT-PCR 法和免疫組化法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)HO

3、-1mRNA 及蛋白表達(dá)變化，并觀察其對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖活力，ICAM-1、MCP-1、IL-8 和VEGF 等細(xì)胞因子mRNA 表達(dá)，以及細(xì)胞分泌MCP-1 的影響。細(xì)胞分為10％健康人血清組、10％MHD 患者血清組、10％MHD 患者血清＋hemin 10μmol/L 組、10％MHD 患者血清＋hemin30μmol/L 組，10％MHD 患者血清＋hemin 30μmol/L＋ZnPP 10μmol/L 組。 結(jié)果：10％

4、MHD 患者血清組內(nèi)皮細(xì)胞較10％健康人血清組表達(dá)MCP-1、ICAM-1、VEGF、IL-8 mRNA 顯著增加，內(nèi)皮細(xì)胞增殖活力顯著下降，并隨著培養(yǎng)基中MHD 患者血清濃度提高損傷作用明顯增強(qiáng)。10％MHD 患者血清可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)HO-1 少量表達(dá)。10μmol/L-30μmol/L的hemin 能顯著增加HO-1 的表達(dá)，30μmol/L 的hemin 能降低透析患者血清引起的內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1、MCP-1 mRNA 過(guò)表達(dá)，

5、10μmol/L-30μmol/L的hemin 進(jìn)一步促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞VEGF mRNA 的表達(dá)，ZnPP 可阻斷或減輕這些作用。但是Hemin 預(yù)處理對(duì)IL-8 mRNA 表達(dá)無(wú)明顯影響。 結(jié)論：利用含MHD患者血清的培養(yǎng)基體外培養(yǎng)HUVECs模擬ESRD患者血管內(nèi)皮環(huán)境，發(fā)現(xiàn)HUVECs被激活，表達(dá)炎癥相關(guān)基因增加,同時(shí)細(xì)胞增殖活力明顯受損。Hemin可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞HO-1mRNA和蛋白高表達(dá)，從而減輕MHD患者血清導(dǎo)致的內(nèi)皮細(xì)