新基因h-PNAS-4治療卵巢癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：卵巢癌是婦科死亡率最高的惡性腫瘤之一，五年生存率僅30％左右，傳統(tǒng)方法治療效果較差，因此有必要尋找新的治療方法。基因治療是一種較有前景的治療方法，新基因的發(fā)現(xiàn)常常能夠促進(jìn)對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展的認(rèn)識(shí)，并有可能發(fā)展成為腫瘤治療的新方法。PNAS-4是實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新基因，它廣泛存在于動(dòng)物和植物體中，初步實(shí)驗(yàn)證明其可誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤生長(zhǎng)。但是對(duì)該基因功能的研究目前還較少，對(duì)卵巢癌的作用研究尚未進(jìn)行。為此該課題設(shè)計(jì)觀察新基因h-PNA

2、S-4對(duì)卵巢癌是否有抗腫瘤作用，是否能成為卵巢癌治療的新方法。 方法：用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，將與靶載體連接好的產(chǎn)物h-PNAS-4-PcDNA3.1轉(zhuǎn)染人卵巢癌上皮細(xì)胞SKOV3。用RT-PCR檢測(cè)h-PNAS-4在轉(zhuǎn)染后卵巢癌細(xì)胞中的過(guò)表達(dá)；用MTT法檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞增殖抑制情況；用瓊脂糖凝膠電泳(DNA-Ladder)檢測(cè)細(xì)胞凋亡；用Hoechst33528染色觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)；用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期；用SK

3、OV3建立卵巢癌裸鼠動(dòng)物模型。每周兩次，50μg質(zhì)粒/只，裸鼠尾靜脈注射給藥，共治療十一次。用游標(biāo)卡尺測(cè)量并記錄裸鼠腫瘤最長(zhǎng)徑和最短徑，計(jì)算腫瘤體積并繪制腫瘤體積-時(shí)間曲線。用HE染色觀察腫瘤組織性狀；用免疫組化檢測(cè)血管上皮特異性標(biāo)記CD31的表達(dá)并計(jì)算組織內(nèi)微血管密度(MVD)，用Tunel染色檢測(cè)腫瘤組織原位凋亡；同時(shí)觀察裸鼠一般狀態(tài)以及對(duì)心、肝、脾、肺、腎的毒副作用的形態(tài)學(xué)進(jìn)行觀察。 結(jié)論： 1、h-PNAS-4-