副豬嗜血桿菌的突變菌株的構(gòu)建及生物學(xué)特性的研究.pdf

1、副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，Hps）引起豬多發(fā)性漿膜炎與關(guān)節(jié)炎（也稱Glasser's?。墙陙硇掳l(fā)現(xiàn)的豬的傳染病。副豬嗜血桿菌可以影響從2周齡仔豬到4月齡的青年豬，給養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本病原菌共有15個(gè)血清型，不同血清型之間無交叉保護(hù)力，給目前具有交叉保護(hù)力的疫苗的研究帶來困難。目前對(duì)該菌的分子生物學(xué)研究剛剛開始，許多基因的功能尚未了解。如能通過構(gòu)建突變體庫，獲得不同表型特征的突變菌株，將有助于

2、對(duì)不同基因進(jìn)行功能性研究。 轉(zhuǎn)座技術(shù)是近年來使用廣泛的一種技術(shù)，利用轉(zhuǎn)座子突變的特征有以下三點(diǎn)：（1）轉(zhuǎn)座子因?yàn)榫哂锌蛇x擇的抗性標(biāo)記而容易在體內(nèi)鑒定突變；（2）經(jīng)轉(zhuǎn)座子誘變的突變子含有已知的DNA片段，可以通過轉(zhuǎn)座子序列的雜交來鑒定突變基因的位置；（3）經(jīng)轉(zhuǎn)座子誘變的突變體具有高度的極性，使得被誘變的基因以及同一操縱子內(nèi)的下游基因完全喪失功能。轉(zhuǎn)座技術(shù)已被用于基因功能的研究。 本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用Tn7轉(zhuǎn)座子體外轉(zhuǎn)座突變Hps血清

3、5型的染色體DNA，再電轉(zhuǎn)到親本菌株內(nèi)，與親本菌的染色體DNA同源重組。從543個(gè)轉(zhuǎn)化子中利用Kan和PCR擴(kuò)增插入片斷的方法篩選得到20株的突變菌株，以小鼠為動(dòng)物模型篩選到1株毒力減弱的突變菌株。其LD<,50>為2.93×10<'9>CFU。與親本菌株相比，毒力明顯下降，用9.5×10<'8>CFU突變菌株免疫小鼠，2周后分別用5×LD<,50>的野生菌（血清5型和血清4型）進(jìn)行攻擊，免疫小鼠對(duì)兩種血清型的攻擊獲得一定程度的保護(hù)力。