他汀類藥物抑制原發(fā)性肝癌生長的研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文他汀類藥物抑制原發(fā)性肝癌生長的研究姓名：李曉軍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：臨床醫(yī)學(xué)肝膽外科學(xué)指導(dǎo)教師：梁力建20060401中山大學(xué)博士學(xué)位論文成。蛋白水解酶中與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系最為密切的首推基質(zhì)金屬蛋白酶( m a t r i x m e t a ] l o p r o t e i n a s e s ，M M P s ) 。腫瘤細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和基質(zhì)成分的相互作用促成了腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移。S t a t i n

2、 s 的抗腫瘤作用涉及腫瘤發(fā)生發(fā)展的多個環(huán)節(jié)，目前的研究多集中在體外實(shí)驗(yàn)，尚缺乏對原發(fā)性肝癌的研究。本研究通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)觀察S t a t i n s 對原發(fā)性肝癌的作用，并對其可能的機(jī)制作初步的探討。第一部分：普伐他汀對肝癌H e p G ：細(xì)胞增殖的抑制作用目的臨床和實(shí)驗(yàn)資料表明H M G —C o A 還原酶抑制劑( S t a t i n s ) 有抗腫瘤作用，我們用S t a t i n s 的代表藥物之一P r a v a

3、s t a t i n ( P r ) 來觀察這類藥物在體內(nèi)外對肝細(xì)胞癌增殖和侵犯的作用并初步探討其可能的作用機(jī)制。方法將H e p G 2 肝癌細(xì)胞置于含1 0 ％4 , 牛血清的R P M l l 6 4 0 培養(yǎng)液中，在3 7 。C 、5 ％C 0 2 、飽和濕度的環(huán)境下培養(yǎng)。首先，將細(xì)胞傳入9 6 孔板，分成四組：A 組為對照組，僅加入含l O ％d 、牛血清的R P M l l 6 4 0 培養(yǎng)液；B 、c 、D 組中除加入上

4、述培養(yǎng)基外，還分別按終濃度l m g ／m l 、0 ．1 m g ／m l 和0 ．O l m g ／m l 的量加入P r 。用M T T比色試驗(yàn)，連續(xù)觀察4 天，檢測肝癌細(xì)胞的增殖情況。將細(xì)胞傳入6 孔板中，培養(yǎng)7 2 h 后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)變化。2 0 只裸小鼠每只左側(cè)頸背部皮下注射O ．2 m l 細(xì)胞懸液，細(xì)胞數(shù)2 X 1 0 6 ／只。5 天時1 7 只形成2 ～3 m m 的皮下結(jié)節(jié)。隨機(jī)分為兩組，P r 組

5、腹腔注射濃度為5 9 ／L的P r O ．2 m l ，對照組注射P B S 緩沖液，每天一次。每三天測量腫瘤長徑( a ) 和短徑( b ) ，按公式計(jì)算腫瘤體積：v = a ×b 2 ／2 。成瘤后觀察三周，匯制腫瘤生長曲線。切除腫瘤，稱取腫瘤重量。抑瘤率= ( 對照組瘤重一實(shí)驗(yàn)組瘤重) ／對照組瘤重x 1 0 0 ％。采用放免法測定動物血中A F P 水平。標(biāo)本1 0 ％中性福爾馬林固定，石蠟包埋，H E 染色鏡下常規(guī)病