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文檔簡介
1、研究目的:子宮內膜癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一。在我國,近年來隨著人民經濟生活的改善與發(fā)展,外源性雌激素的應用、不孕等,其發(fā)病率亦顯著上升。目前對于該病的病因及發(fā)病機制認識尚不夠深入,缺乏對因治療。腫瘤分子生物學研究表明,子宮內膜癌的發(fā)生、發(fā)展與癌基因的激活及抑癌基因的失活有關。眾所周知,抑癌基因的失活有兩條途徑:基因內突變和染色體物質的丟失。但近期的研究表明:除去此兩種機制外,DNA甲基化也是腫瘤抑制基因失活的機制之一,DNA
2、甲基化是由酶介導的一種化學修飾,是將甲基(-ch3)選擇性的添加到DNA上。在某些情況下,DNA甲基化是腫瘤抑制基因失活的唯一機制。DNA甲基化降低了序列特異性轉錄因子結合的親和力,MSP即methylation-specificPCR,是研究DNA甲基化最常用的方法,其作用機制:利用DNA經亞硫酸氫鈉修飾后胞嘧啶轉化為尿嘧啶,而此修飾對于甲基化的胞嘧啶(5-甲基胞嘧啶)無效。利用甲基化和非甲基化DNA單鏈序列的差異來設計不同的PCR引
3、物,而這類PCR引物就可以放大甲基化的DNA單鏈或非甲基化DNA單鏈。該方法靈敏度高,只需要很少量的DNA。 APC基因即adenomatouspolyposiscoli是Wnt信號傳導通路上一個重要的抑癌基因,定位于染色體5q21,已有文獻證明APC基因表達異常與多種腫瘤的發(fā)生有關。本試驗從分子生物學水平上研究了APC基因在正常的增生期子宮內膜組織、不典型增生的子宮內膜組織、子宮內膜癌組織中的甲基化情況,以及該基因所表達的蛋白
4、在上述三種組織的石蠟切片中的表達情況,旨在探討APC基因的甲基化是否是子宮內膜癌的發(fā)病機制之一,可否作為子宮內膜癌基因治療的靶點。 實驗方法:收集2004年3月~2006年2月在中山大學附屬第一醫(yī)院婦科住院并且接受手術治療的子宮內膜癌患者40例,取其腫瘤組織,同期計生門診診刮獲得的不典型增生的子宮內膜組織30例,同期住院行全子宮切除患者的正常的增生期子宮內膜組織30例,新鮮組織在離體1小時內獲得,放入液氮內保存。所取標本一部分用
5、于提取DNA、RNA,另一部分用于做免疫組化試驗。所取標本的病理類型皆為子宮內膜樣腺癌。按FIGO(1988年)標準進行臨床分期,Ⅰ期29例,Ⅱ期7例,Ⅲ期4例?;颊吣挲g24~67歲,平均49.33歲。患者術前均未行化療、放療或免疫治療等抗腫瘤治療。提取其DNA、RNA,行MSP及RT—PCR等試驗,檢測APC的甲基化情況;應用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶染色法(S-P法),檢測APC蛋白在子宮內膜癌、正常子宮內膜、不典型子宮
6、內膜組織中的表達情況。試驗結果采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對所得數據進行分析。三種不同的組織標本兩兩比較,采用Chi-square檢驗或Fisher精確概率檢驗進行分析,用Spearman相關系數檢測其相關性。檢驗水準α=0.05,以P<0.05認為差異有顯著性。 結果:正常的增生期子宮內膜組織中APC的甲基化率為23.33%(7/30),不典型增生的子宮內膜組織中的甲基化率為33.33%(10/30),子宮內膜癌的腫瘤組織中的
7、甲基化率為60%(24/40)。子宮內膜癌組織與正常組織相比,有統(tǒng)計學意義;子宮內膜癌組織與不典型增生組織相比,有統(tǒng)計學意義;不典型增生組織與正常組織相比,無統(tǒng)計學意義。 正常的增生期子宮內膜組織中APC的表達率為73.33%(22/30),不典型增生的子宮內膜組織中的表達率為63.33%(19/30),子宮內膜癌的腫瘤組織中的表達率為35%(14/40)。子宮內膜癌組織與正常組織相比,有統(tǒng)計學意義;子宮內膜癌組織與不典型增生組
8、織相比,有統(tǒng)計學意義;不典型增生組織與正常組織相比,無統(tǒng)計學意義。 免疫組化的結果表明:正常的增生期子宮內膜組織中的蛋白表達率為66.67%(20/30),不典型增生的子宮內膜組織中的蛋白表達率為50%(15/30),子宮內膜癌的腫瘤組織中APC蛋白的表達率為12.5%(5/40)。子宮內膜癌組織與正常組織相比,有統(tǒng)計學意義;子宮內膜癌組織與不典型增生組織相比,有統(tǒng)計學意義;不典型增生組織與正常組織相比,無統(tǒng)計學意義。
9、子宮內膜癌APC基因的未甲基化率為40%,表達率是35%,蛋白的表達率為12.5%,三者分別行相關性檢驗,發(fā)現(xiàn)子宮內膜癌中APC基因的未甲基化與其在RNA的表達情況呈正相關,相關系數為0.899;與其在蛋白質中的表達情況呈正相關,相關系數為0.463;APC基因在RNA中的表達與其在蛋白中的表達也呈正相關,相關系數為0.515。不典型增生組織中的未甲基化率與表達率相比,相關系數依次為0.929、0.707、0.761,皆呈正相關。正常組
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