microRNA-520d-5p在風(fēng)濕性心臟病房顫患者心肌組織中的表達(dá)分析與靶基因預(yù)測的研究.pdf

1、目的：探討microRNA-520d-5p在風(fēng)濕性心臟病房顫患者心肌組織中的表達(dá)差異并進(jìn)行驗證，預(yù)測下游可能的靶基因，為尋求安全、有效治療房顫的藥物提供新的靶點。
　　方法：⑴經(jīng)知情同意，采集風(fēng)心病與瓣膜病瓣膜置換術(shù)患者右心耳心肌組織，共分為5組：風(fēng)心病合并房顫組（簡稱風(fēng)心房顫組）；風(fēng)心病無合并房顫組（簡稱風(fēng)心無房顫組）；非風(fēng)心瓣膜病組（簡稱瓣膜病組）；風(fēng)心病房顫組+風(fēng)心病無房顫組（簡稱風(fēng)心病組）；風(fēng)心無房顫組+瓣膜病組（簡稱無房

2、顫組）；⑵提取右心耳組織總 RNA并質(zhì)檢合格后，應(yīng)用 Affymetrix microRNA芯片檢測分析風(fēng)心房顫組、風(fēng)心無房顫組、非風(fēng)心病組中心肌組織 microRNAs表達(dá)譜的差異，篩選出表達(dá)差異顯著的microRNAs。⑶采用RT-PCR方法對篩選出的目的miRNAs（hsa-miRNA-520d-5p和hsa-miRNA-4723）進(jìn)行大樣本量的組織驗證；⑷應(yīng)用生物信息學(xué)軟件(TargetScan、miRDB與microRNA.o

3、rg)預(yù)測hsa-miRNA-520d-5p下游靶基因，并結(jié)合《人類基因功能手冊》與NCBI平臺篩選與房顫相關(guān)的靶基因并了解可能的作用機(jī)制。
　　結(jié)果：①Affymetrix microRNA芯片檢測結(jié)果：風(fēng)心房顫組與風(fēng)心無房顫組相比，6個microRNAs表達(dá)上調(diào)，16個表達(dá)下調(diào)，其中hsa-miR-4723明顯上調(diào)，hsa-miR-520d-5p明顯下調(diào)；風(fēng)心病組與非風(fēng)心病組相比，46個microRNAs表達(dá)上調(diào)，21個表達(dá)下

4、調(diào)。②Real-time PCR驗證結(jié)果：hsa-miR-520d-5p表達(dá)豐度在風(fēng)心房顫組顯著下調(diào)，與風(fēng)心無房顫組相比差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與非房顫組相比差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；而風(fēng)心病組與非風(fēng)心病組相比，二者h(yuǎn)sa-miR-520d-5p表達(dá)豐度差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；風(fēng)心房顫組與風(fēng)心無房顫組相比、風(fēng)心房顫組與非房顫組相比、風(fēng)心病組與非風(fēng)心病組相比，hsa-miR-4723表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義

5、（P＞0.05）。③microRNA靶基因預(yù)測結(jié)果：TargetScan、microRNA.org、miRDB共同預(yù)測的has-miR-520d-5p靶基因共有491個，其中可能與信號傳導(dǎo)通路、心肌纖維化、膠原合成密切有關(guān)的基因39個，最終與房顫相關(guān)的靶基因確定有9個，包括：ADAM10/15/17、SMAD3、TEAD-1、COL1a1/3a1、Zeb2-Meox2、DLG5、PDE2、MEF2A、TGFβ。
　　結(jié)論：⑴風(fēng)濕性

6、心臟病房顫患者心肌組織的microRNAs芯片表達(dá)譜明顯異常。⑵經(jīng)臨床大樣本驗證，房顫患者心肌組織hsa-miR-520d-5p表達(dá)水平顯著下調(diào)，而hsa-miR-4723表達(dá)水平無明顯變化。⑶hsa-miR-520d-5p可能通過調(diào)控ADAM10/15/17、SMAD3、TEAD-1、COL1a1/3a1、Zeb2-Meox2、DLG5、PDE2、MEF2A、TGFβ靶基因表達(dá)，影響信號傳導(dǎo)通路、膠原代謝、心肌纖維細(xì)胞等從而參與房顫的