環(huán)巴胺對(duì)胃癌細(xì)胞BGC-823增殖及Hedgehog通路、E-cadherin、β-catenin表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究異甾體類生物堿藥物環(huán)巴胺對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC-823增殖及凋亡的影響,并初步探討其可能的作用機(jī)制。 方法：MTT比色法研究環(huán)巴胺對(duì)BGC-823細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)；倒置顯微鏡及熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變；流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期分布；RT-PCR方法檢測(cè)Hedgehog信號(hào)通路中的主要因子SHH、GLll及E-eadherin、β-catenin mRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果：MTT比色法顯示環(huán)

2、巴胺可以明顯抑制BGC-823細(xì)胞的體外增殖,并呈時(shí)間-劑量依賴性,環(huán)巴胺作用于該細(xì)胞24、48、72h的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為64.87,51.23和38.65μmol/L(P<0.05)。環(huán)巴胺作用24h后,倒置顯微鏡及熒光顯微鏡下均觀察到不同的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。倒置顯微鏡下觀察到大部分細(xì)胞變圓漂浮,部分細(xì)胞固縮、分解,并出現(xiàn)細(xì)胞碎片；熒光顯微鏡下觀察到活細(xì)胞核染成均勻綠色,早期凋亡細(xì)胞核染成亮綠色,晚期凋亡細(xì)胞核染成橘黃色,

3、壞死細(xì)胞核染成橘紅色。流式細(xì)胞術(shù)顯示環(huán)巴胺可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并將細(xì)胞阻滯在G1期,32、64、96μmol/L的環(huán)巴胺作用于細(xì)胞24 h后,細(xì)胞凋亡率分別為12.50％、31.50％、56.10％,而空白對(duì)照組為2.10％(P<0.05)。在BGC-823細(xì)胞中SHH、GLll、β-catenin mRNA呈高表達(dá),而E-cadherin呈低表達(dá),環(huán)巴胺作用后,GLll、β-catenin mRNA表達(dá)下調(diào),E-cadherin mRNA