富含半胱氨酸酸性分泌糖蛋白及其肽段對人系膜細胞增殖和凋亡作用的研究.pdf

1、目的： 研究富含半胱氨酸酸性分泌糖蛋白(SPARC)的全長蛋白及其2.1肽段對人腎小球系膜細胞(HMC)增殖、凋亡和細胞周期調(diào)控蛋白表達以及細胞外基質(zhì)mRNA表達的影響。 方法 應(yīng)用的技術(shù)包括噻唑藍(MTT)法檢測細胞增殖、流式細胞術(shù)檢測細胞周期、Western blot檢測細胞周期調(diào)控蛋白cyclinD1和P21<'Wafl>的表達、透射電鏡觀察細胞形態(tài)學(xué)的變化、Annexin WPI雙染色方法檢測細胞凋亡指數(shù)

2、、實時熒光定量RT-PCR法檢測細胞外基質(zhì)(ColI、ColIV、LN、FN)mRNA的水平、夾心ELISA法對IgAN 患者和正常人血液和尿液中SPARC和細胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6進行定量檢測、免疫組織化學(xué)檢測SPARC在IgAN患者及正常人腎組織中的表達及分布等。 結(jié)果 (1)SPARC及其肽段能夠抑制HMC增殖，呈良好的時效與量效關(guān)系；(2)SPARC及其肽段可使HMC的細胞周期阻滯在G0/G1期

3、，并誘導(dǎo)細胞凋亡，電鏡下可見典型的凋亡小體；(3)SPARC及其肽段對HMC細胞周期調(diào)控蛋白的表達有影響，使CyclinD1的表達明顯減弱、P21<'Wafl>的表達明顯增強；(4)SPARC及其肽段可使細胞外基質(zhì)ColI、ColIV、FN mRNA 的表達明顯下調(diào)；(5)SPARC在IgA腎病小管上皮細胞中表達明顯增強；(6)IgAN患者血液和尿液中的SPARC含量顯著高于正常人；IgAN患者血液中的炎性細胞因子TNF-α、IL-1β