供體未成熟樹突狀細胞對急性血管性排斥反應(yīng)的影響.pdf

1、目的：利用小鼠至酗大鼠異種異位心臟移植模型，研究供體未成熟樹突狀細胞對急性血管性排斥反應(yīng)(acute vascular rejection，AVR)的影響，探討異種心臟移植免疫耐受機制。 方法：兩組體外培養(yǎng)的小鼠骨髓細胞，分別采用常規(guī)劑量(GM hi)和低劑量(GM lo)GM-CSF誘導(dǎo)，使其分化為樹突狀細胞(DC)。倒置顯微鏡觀察兩組DC(GM hi DC和GM lo DC)形態(tài)，流式細胞術(shù)檢測DC表面CDllc、CD86、

2、MHC-II及混合淋巴細胞反應(yīng)實驗檢測DC對異種T細胞的增殖能力的影響來鑒定DC的純度及成熟度。 成功獲得小鼠骨髓源樹突狀細胞，行小鼠到大鼠頸部心臟移植。小鼠和SD大鼠分別作為供受體，隨機分為三組，A組(對照組)：僅行小鼠到大鼠頸部心臟移植；B組(GM hi DC組)：受體靜脈注射GM hi DC后第7天行小鼠到大鼠頸部心臟移植；C組(GM lo DC組>：受體靜脈注射GM lo DC后第7天行小鼠到大鼠頸部心臟移植。測定移植前

3、一天各組受體外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞比例及血清IL-10、TGF-β1水平、記錄各組移植心臟的存活時間和病理變化。 結(jié)果：(1)GM-CSF培養(yǎng)小鼠骨髓前體細胞所得細胞CDllc陽性率：常規(guī)劑量組為71.94±2.92％，低劑量組為70.46±2.53％，兩者無顯著性差異(P>0.05)。(2)CDllc+細胞(DC)表面MHCII、CD86表達：GM hi DC分別為66.47±2.55％、11.43±1.87％，

4、GM lo DC分別為59.92±3.50％、0.98±0.56％。GM hi DC表面MHCII陽性率較GM Io DC高表達(P<0.05)，GM hi DC表面CD86陽性率較GM lo DC高(P<0.05)。(3)MLR測得吸光度(optical density，OD)值：GM hi DC組為1.1±0.08，GM lo DC組為0.60±0.03；刺激效應(yīng)：GM hi DC組為173.81±10.05％，GM lo DC組為

5、49.03±5.54％，兩組比較有顯著性差異(P<0.05)。(4)供心存活時間：A組：1.98±0.51天，B組：1.8±0.57天，C組：3.2±0.27天，A與B組組間比較P>0.05，C組較A組和B組延長(P<0.05)。(5)移植后供心病理：A組、B組、C組呈急性血管排斥反應(yīng)。(6)大鼠外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞比例：A組：2.7±0.57％，B組：2.89±0.81％，C組：5.54±1.18％，A與B組比較P>0

6、.05，C組較A組和B組高(P<0.05)。(7)大鼠血清IL-10、TGF-β1水平：A組：18.87±2.69 pg/ml、25.78±3.26 pg/ml，B組：20.74±5.36 pg/ml、27.07±5.24pg/ml，C組：26.12±4.88 pg/ml、34.00±3.80 pg/ml，A與B組比較P>0.05，C組較A組和B組高(P<0.05)。 結(jié)論：利用GM-CSF誘導(dǎo)培養(yǎng)小鼠骨髓前體細胞，能得到足量純

7、度較高的樹突狀細胞。常規(guī)劑量組培養(yǎng)所獲得的DC(GMhiDC)為成熟DC與未成熟DC的混合體，表型為CD11c+、MHCII hi、CD86±;而低劑量組培養(yǎng)所獲得的DC(GMloDC)為較為單一的未成熟DC，表型為CD11c+、MHCIIlow、CD86-。GMloDC與GMhiDC相比，體外刺激異種T淋巴細胞的增殖能力較弱．靜脈注射供者imDC對異種心臟移植受體AVR有一定的抑制作用，可以延長供心存活時間。這可能與imDC誘導(dǎo)產(chǎn)生C