替米沙坦對脂多糖刺激脂肪細(xì)胞分泌細(xì)胞因子和相關(guān)炎癥通路的影響.pdf

1、研究背景:高血壓、糖尿病、脂質(zhì)代謝紊亂和肥胖常常簇集出現(xiàn)而形成代謝綜合征，嚴(yán)重影響公眾的健康水平，微炎癥反應(yīng)在其中發(fā)揮了重要的作用。腎素-血管緊張素(RAS)系統(tǒng)除了血流動(dòng)力學(xué)作用外，還促進(jìn)微炎癥反應(yīng)。阻斷RAS系統(tǒng)，對上述疾病具有一定的保護(hù)作用。RAS系統(tǒng)組分也存在于脂肪組織和脂肪細(xì)胞中，因此脂肪組織和脂肪細(xì)胞可能成為血管緊張素受體拮抗劑(ARBs)的作用靶點(diǎn)。
　　目的:研究血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑替米沙坦對脂多糖(LPS)刺激

2、脂肪細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子a(TNF-a)、脂聯(lián)素及三者mRNA表達(dá)的影響，并深入探討替米沙坦對脂肪細(xì)胞NF-кB通路和MAPK通路相關(guān)蛋白NF-кBp65、p-IкBa、IкBa、P-ERK1/2、ERK1/2、p-p38MAPK、p38MAPK、p-JNK和JNK滾達(dá)的影響。
　　方法:將培養(yǎng)成熟的脂肪細(xì)胞隨機(jī)分為6組：對照組，LPS(1μg/ml)組，LPS+替米沙坦0.01μg/ml，0.1μg/m

3、l，1μg/ml和10μg/ml。對照組加DMSO，LPS+替米沙坦組加入不同濃度替米沙坦，孵育2h后，LPS組和LPS+替米沙坦組再加入脂多糖(1μg/ml)孵育1h。細(xì)胞經(jīng)上述處理后，提取細(xì)胞上清和細(xì)胞總RNA，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和實(shí)時(shí)定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)(Q-PCR)分別檢測各組TNF-a、IL-6和脂聯(lián)素的蛋白分泌水平及mRNA基因表達(dá)的差異。收集細(xì)胞，提取核蛋白和總蛋白，用Western免疫印跡法檢測各組核蛋白NF-к

4、 Bp65、總蛋白p-Iк Ba、Iк Ba、p-ERK1/2、ERK1/2、p-p38MAPK、p38MAPK、p-JNK和JNK的表達(dá)，比較各組NF-к Bp65核轉(zhuǎn)位以及其它蛋白磷酸化水平的差異。
　　結(jié)果:與對照組相比，脂多糖刺激可使IL-6分泌升高2.7倍，mRNA表達(dá)升高4倍，替米沙坦干預(yù)后IL-6分泌及其mRNA表達(dá)均隨替米沙坦?jié)舛壬叱氏陆第厔?，其中最大劑量替米沙?10μg/ml)干預(yù)后，IL-6分泌水平和mRN

5、A表達(dá)分別下降約63％和67％。TNF-a分泌及其mRNA表達(dá)也隨替米沙坦?jié)舛壬叱氏陆担c對照組相比，脂多糖刺激使TNF-a分泌升高約1.3倍，mRNA表達(dá)升高約3.5倍，最大劑量替米沙坦(10μg/ml)干預(yù)后，TNF-a分泌水平下降23％，mRNA表達(dá)下降86％。較之對照組，大劑量替米沙坦可使脂聯(lián)素的分泌及mRNA表達(dá)升高，而脂多糖對脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素的分泌和mRNA表達(dá)沒有影響。脂多糖刺激后脂肪細(xì)胞胞漿內(nèi)Iк Ba磷酸化蛋白表達(dá)增強(qiáng)

6、，NF-к Bp65蛋白核轉(zhuǎn)位增加，胞核P]NF-к Bp65蛋白表達(dá)增多，MAPK通路相關(guān)蛋白ERK1/2磷酸化和p38MAPK磷酸化水平也增強(qiáng)，而JNK蛋白磷酸化未檢測到。10μg/ml替米沙坦干預(yù)后，NF-к Bp65蛋白核轉(zhuǎn)位受抑制，核蛋白NF-к Bp65表達(dá)減少，Iк Bα磷酸化表達(dá)也減少，MAPK通路蛋白ERK1/2磷酸化表達(dá)和p38MAPK磷酸化表達(dá)均減少。
　　結(jié)論:替米沙坦能通過直接影響脂肪細(xì)胞炎性因子的分泌而