結(jié)核分枝桿菌感染人源樹(shù)突狀細(xì)胞的研究.pdf

1、結(jié)核病作為全球性的健康問(wèn)題，其發(fā)病率和死亡率逐年上升，每年導(dǎo)致8百萬(wàn)人發(fā)病，2-3百萬(wàn)人死亡。世界衛(wèi)生組織已將結(jié)核病列為重點(diǎn)控制的三種傳染病之一，強(qiáng)調(diào)遏制結(jié)核病行動(dòng)已到了刻不容緩的程度。結(jié)核分枝桿菌(MTB)是結(jié)核病的病原菌。MTB在感染宿主機(jī)體的過(guò)程中，與宿主抗原遞呈細(xì)胞一一樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)的相互作用對(duì)機(jī)體的免疫應(yīng)答起始起到了決定性的作用。DCs是最有效的抗原呈遞細(xì)胞。樹(shù)突狀細(xì)胞能夠攝取外來(lái)物質(zhì)，包括結(jié)核分枝桿菌，并將其呈遞給效應(yīng)

2、性淋巴細(xì)胞，激發(fā)宿主對(duì)抗病原微生物感染的免疫反應(yīng)。因此結(jié)核分枝桿菌與樹(shù)突狀細(xì)胞的相互作用在感染初期機(jī)體發(fā)動(dòng)免疫應(yīng)答中十分重要。研究樹(shù)突狀細(xì)胞和結(jié)核分枝桿菌間的相互作用，有利于從根本上了解細(xì)菌．宿主作用機(jī)理，為闡明結(jié)核分枝桿菌逃避免疫的機(jī)制提供依據(jù)。 本研究利用雙向電泳技術(shù)對(duì)結(jié)核分枝桿菌H37Rv、H37Ra株感染人源樹(shù)突狀細(xì)胞前后的全細(xì)胞蛋白表達(dá)譜進(jìn)行差異比較和分析，發(fā)現(xiàn)H37Rv株的感染能特異地引致差異表達(dá)蛋白斑點(diǎn)23個(gè)。利用

3、基質(zhì)輔助激光解析／電離串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)對(duì)其中的4個(gè)表達(dá)明顯上調(diào)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行分析鑒定，獲得4個(gè)明確的肽指紋圖譜，通過(guò)在數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索分析，確定這4個(gè)蛋白質(zhì)分別為人亞砷酸誘導(dǎo)ATP酶I(hASNA-I)，膜聯(lián)蛋白IV(A肌exinIV)，γ-肌動(dòng)蛋白(γ-actin)，熱休克蛋白27(HSP27)。上述發(fā)現(xiàn)有助于了解結(jié)核分枝桿菌入侵早期導(dǎo)致的樹(shù)突狀細(xì)胞蛋白質(zhì)組表達(dá)變化，為深入研究結(jié)核分枝桿菌一宿主相互作用提供了探索方向。 為了

4、更全面的了解細(xì)菌一宿主細(xì)胞間的相互作用，本研究利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)在轉(zhuǎn)錄組水平對(duì)結(jié)核分枝桿菌感染樹(shù)突狀細(xì)胞后所導(dǎo)致的差異變化作了進(jìn)一步分析。發(fā)現(xiàn)H37Rv株感染樹(shù)突狀細(xì)胞所特異引致上調(diào)表達(dá)的4個(gè)蛋白，其在轉(zhuǎn)錄水平上也呈上調(diào)表達(dá)。上述對(duì)結(jié)核分枝桿菌感染樹(shù)突狀細(xì)胞的蛋白質(zhì)組水平以及轉(zhuǎn)錄組水平的研究，較全面地探討了結(jié)核分枝桿菌入侵宿主機(jī)體過(guò)程中，細(xì)菌一宿主細(xì)胞間的相互作用，有助于闡明細(xì)菌入侵機(jī)制與潛伏機(jī)理，為針對(duì)結(jié)核分枝桿菌