MDR1-MRP反義寡核苷酸逆轉(zhuǎn)人胃腺癌細(xì)胞SGC7901-ADM多藥耐藥的研究.pdf

1、目的：探討應(yīng)用MDRl／MRP反義寡脫氧核苷酸(antisenseoligodooxynucleotide,ASODN)片段對人胃腺癌耐藥細(xì)胞SGC7901／ADM多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)作用。 方法：人工合成互補(bǔ)于MDRl及MRP基因mRNA特定片段的ASODN，并合成相應(yīng)的SODN片段作為對照。用陽離子脂質(zhì)體Lipofectamine2000(LF)將ASODN及SODN分別轉(zhuǎn)染SGC7901／ADM細(xì)胞，采用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)、免

2、疫細(xì)胞化學(xué)及RT-PCR,檢測SGC7901／ADM經(jīng)體外轉(zhuǎn)染脫氧寡核苷酸片段(oligodooxynucleotide，ODN)后對ADM等抗癌藥的敏感性、胞內(nèi)Rhl23的平均熒光強(qiáng)度、細(xì)胞周期的改變及MDRl、MRP在基因和蛋白水平上表達(dá)的變化。 結(jié)果： 1．MTT法和流式證實，MDRl+MRP／ASODN聯(lián)合轉(zhuǎn)染SGC7901／ADM細(xì)胞，與單獨(dú)任何～種ASODN轉(zhuǎn)染相比都能更大程度增加對阿霉素、卡鉑等化療藥物的敏

3、感性，細(xì)胞對阿霉素的IC50由轉(zhuǎn)染前的16．82ug/m1降至2．34ug/ml。 2．流式細(xì)胞儀分析兩種ASODN聯(lián)合轉(zhuǎn)染48h后，與相應(yīng)的SODN對照片段作用后相比，細(xì)胞在同樣劑量化療藥物的作用下，出現(xiàn)更明顯的細(xì)胞周期阻滯，大量細(xì)胞被阻滯于S期,GO／G1期比例顯著下降，S期百分?jǐn)?shù)升高。其中阿霉素組出現(xiàn)凋亡峰，聯(lián)合轉(zhuǎn)染組凋亡率明顯升高。 3．RT-PCR結(jié)果顯示，ASODN轉(zhuǎn)染SGC7901／ADMl2h后MDRlm

4、RNA、MRPmRNA的表達(dá)開始降低，24h后下降最明顯，48h恢復(fù)至轉(zhuǎn)染前水平。免疫細(xì)胞化學(xué)證實轉(zhuǎn)染ASODN48h后，SGC7901／ADM細(xì)胞P-gp、MRP的表達(dá)顯著下降。 4．Rhl23泵出率實驗發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染后48h，細(xì)胞內(nèi)Rhl23的潴留量顯著高于轉(zhuǎn)染前，其平均熒光強(qiáng)度聯(lián)合轉(zhuǎn)染組顯著高于單純轉(zhuǎn)染。 結(jié)論：轉(zhuǎn)染ASODN／LF可部分逆轉(zhuǎn)人胃腺癌耐藥細(xì)胞SGC7901／ADM多藥耐藥，聯(lián)合轉(zhuǎn)染MDRl、MRP兩種A