神犀丹對內(nèi)毒素休克大鼠損傷臟器的保護作用及炎癥細胞因子影響的研究.pdf

1、近年來，隨著中醫(yī)對臨床急危重癥工作的開展，中醫(yī)對感染性休克病因病機及治則認識的不斷加深，提出外來溫?zé)岫拘?，引起正氣不足，氣耗陰脫、脈絡(luò)瘀阻，陰陽之氣不相順接，陽氣郁閉于內(nèi)，四肢得不到溫養(yǎng)，以致逆冷成厥，氣機逆亂，神明失主是其主要病機，采用涼血化瘀解毒，養(yǎng)陰生津，芳香化濁開竅法治療，取得一定的療效。本課題在既往臨床有效的前提下，研究神犀丹對感染性休克大鼠損傷臟器的保護作用，并從相關(guān)炎癥細胞因子角度研究其作用機制，以期為該方所體現(xiàn)的治法治療

2、感染性休克的作用機制研究開辟思路，為臨床運用提供理論根據(jù)。
　　目的：觀察涼血散血開竅法代表方神犀丹對內(nèi)毒素休克大鼠損傷臟器的保護作用及相關(guān)炎癥細胞因子的影響。
　　方法：
　　實驗一采用60只SPF級,SD大鼠,雄性,隨機分為正常組、模型組、神犀丹組。除正常組外，其余各組均給予腹腔注射D_氨基半乳糖（GalN）和尾靜脈注射脂多糖（LPS）復(fù)制內(nèi)毒素休克大鼠模型，采用BL-42OE+生物機能實驗系統(tǒng)全程監(jiān)測平均動脈壓（

3、MAP）的變化，于0、2、6h采集血清標(biāo)本，檢測全血細胞、血清總膽紅素（TB）、乳酸脫氫酶（LDH）、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）的含量；于0、2、6h每組處死大鼠4只，蘇木精-伊紅（HE）染色，光鏡下觀察大鼠肺肝組織的病理變化。
　　實驗二采用24只SPF級,SD大鼠,雄性,隨機分為正常組、模型組、神犀丹組。除正常組外，其余各組均給予腹腔注射D_氨基半乳糖（GalN）和尾靜脈注射脂多糖（LPS）復(fù)制內(nèi)毒素休克大鼠模

4、型，于0、2、6h采用酶聯(lián)免疫吸附法，檢測TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、IL-10等細胞因子表達水平。
　　采用統(tǒng)計學(xué)軟件spss19.0進行單因素方差分析。實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準差（x±s）表示，組間比較用F檢驗，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01表示差異有統(tǒng)計非常顯著意義。
　　結(jié)果：
　　1.平均動脈壓的變化情況：在實驗過程中正常組大鼠血壓大致保持正常，有輕微下降考慮是與每次抽血和實驗創(chuàng)傷

5、有關(guān)；模型組大鼠在注射內(nèi)毒素后，血壓大多數(shù)在0.5h開始下降，之后持續(xù)緩慢波動性下降；神犀丹組大鼠血壓的變化趨勢與模型組基本相同，但血壓開始下降的時間遲于模型組，至6h時下降明顯，6h時間點血壓降低程度與模型組相比明顯減輕。
　　2.全血細胞含量變化:注射 LPS后2h、6h，模型組白細胞(WBC)明顯低于正常組;神犀丹組在注LPS后2h和6hWBC也明顯降低，與正常組比較有顯著性差異意義,與模型組相比無顯著性差異。血小板計數(shù)(p

6、lt)在2小時，模型組與神犀丹組均無明顯下降；而至6h時，模型組 plt明顯低于正常組,但是神犀丹組卻無明顯降低，明顯高于模型組,說明神犀丹能降低血小板的聚集。
　　3.大鼠血生化TB、LDH、AST、ALT含量變化：與正常組比較，模型組大鼠血清中TB、LDH、AST、ALT的含量均顯著升高；神犀丹組與模型組比較，血清TB、LDH、AST、ALT的含量上升幅度與模型組比較有顯著差異。
　　4.肺組織病理學(xué)改變：
　　肉

7、眼觀察:正常組,肺膨脹良好,表面無出血;模型組,肺體積增大,呈暗紅色,表面可見不同程度充血水腫,或見點灶狀出血;神犀丹組肺臟呈淺紅色,表面不同程度充血水腫。
　　光鏡下肺組織形態(tài)：不同時間點（0、2、6h）正常組肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，肺泡完整，未見炎癥細胞浸潤病變；模型組2小時大鼠肺毛細血管明顯擴張出血，血管腔內(nèi)有微血栓形成，肺泡間隔增寬增厚，大量炎性細胞浸潤；6小時大鼠肺組織結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡腔內(nèi)纖維蛋白滲出，部分肺泡萎縮，可見大量炎

8、癥細胞浸潤。神犀丹組2小時大鼠肺血管腔內(nèi)可見少量紅細胞，肺間質(zhì)結(jié)構(gòu)基本正常，肺泡壁少量炎性滲出物，可見輕到中度炎癥細胞浸潤；6小時大鼠可見肺內(nèi)充血，肺泡腔及肺間質(zhì)可見中量炎癥細胞浸潤。
　　5.肝組織病理學(xué)改變：
　　光鏡下肝組織形態(tài)：不同時間點（0、2、6h）正常組肝組織：肝竇形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，未見炎癥細胞浸潤；模型組2小時大鼠肝細胞大量彌漫性壞死，肝竇結(jié)構(gòu)紊亂，匯管區(qū)可見輕到中度炎癥細胞浸潤；6小時大鼠肝細胞大量片狀彌漫性壞

9、死，肝竇結(jié)構(gòu)破壞，匯管區(qū)可見大量炎癥細胞浸潤。神犀丹組2小時大鼠肝細胞少量彌漫性壞死，肝竇結(jié)構(gòu)紊亂，匯管區(qū)可見輕到中度炎癥細胞浸潤；6小時大鼠肝細胞點狀壞死，匯管區(qū)可見大量炎癥細胞浸潤。
　　6.大鼠血清TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、IL-10表達水平：與正常組比較，不同時間點(2、6h)模型組及神犀丹組大鼠血清中TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、IL-10的表達水平均顯著升高；神犀丹組與模型組比較，經(jīng)藥物干預(yù)

10、后的神犀丹組血清TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、IL-10的表達水平上升幅度與模型組比較有顯著性差異。
　　結(jié)論：
　　1.神犀丹能有效緩解內(nèi)毒素休克大鼠血壓下降程度，進而對損傷臟器起保護作用。
　　2.神犀丹有改善內(nèi)毒素休克大鼠感染情況、改善肝功能，降低血小板聚集，改善微循環(huán)的作用。
　　3.神犀丹能夠明顯減輕內(nèi)毒素休克大鼠肺肝組織的炎癥反應(yīng)。
　　4.涼血散血開竅法典型方神犀丹能夠顯著降低大鼠